LncRNA-MALAT1與Hsa-miR-1互作機(jī)制對(duì)大腸癌放射敏感性的影響研究.pdf

1、目的：
　　1.篩選鑒定大腸癌放射敏感性相關(guān)LncRNA及其靶向作用microRNA。
　　2.初步闡明LncRNA-MALAT1與hsa-miR-1對(duì)大腸癌細(xì)胞放射敏感性的影響機(jī)制。
　　3.探討LncRNA-MALAT1與hsa-miR-1相互作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.通過(guò)對(duì)7株大腸癌細(xì)胞進(jìn)行克隆形成實(shí)驗(yàn)，挑選出放射抵抗與放射敏感細(xì)胞株，采用二代測(cè)序法篩選放射誘導(dǎo)過(guò)程中差異表達(dá)的LncRNA。對(duì)差

2、異表達(dá)的LncRNA進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　2.使用實(shí)時(shí)定量 PCR技術(shù)分別檢測(cè)大腸癌細(xì)胞和大腸癌組織標(biāo)本中LncRNA-MALAT1及hsa-miR-1的表達(dá)量。
　　3.利用轉(zhuǎn)染技術(shù)分別下調(diào)和上調(diào)大腸癌細(xì)胞中LncRNA-MALAT1和hsa-miR-1表達(dá)并聯(lián)合照射處理后，通過(guò)MTT、生長(zhǎng)克隆、劃痕、凋亡及Western Blot實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞活力、增殖能力、遷移能力、細(xì)胞凋亡率以及MMP-2、MMP-9、E鈣粘蛋

3、白、Bax和 Bcl-2蛋白表達(dá)。
　　4.通過(guò)生物信息學(xué)分析，找出LncRNA-MALAT1上hsa-miR-1結(jié)合位點(diǎn)，構(gòu)建包含此位點(diǎn)的熒光素酶報(bào)告基因，通過(guò)檢測(cè)熒光素酶報(bào)告基因的活力來(lái)驗(yàn)證兩者的靶向結(jié)合能力，分別調(diào)控細(xì)胞中LncRNA-MALAT1和hsa-miR-1表達(dá)量，進(jìn)一步驗(yàn)證兩者之間的相互調(diào)控作用。
　　結(jié)果：
　　1.通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)，我們?cè)?株大腸癌細(xì)胞中篩選出放射敏感性差異最大的兩株細(xì)胞株，即放射

4、抵抗的CCL244細(xì)胞和放射敏感的HCT116細(xì)胞。
　　2.二代測(cè)序結(jié)果顯示，照射前后兩株細(xì)胞間均差異表達(dá)的lncRNA有24條（2倍差異以上），通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，其中 LncRNA-MALAT1有極強(qiáng)的microRNA結(jié)合能力，hsa-miR-1為其靶向microRNA。
　　3.隨著照射劑量增加，照射后時(shí)間延長(zhǎng)，CCL244細(xì)胞中LncRNA-MALAT1表達(dá)量升高，hsa-miR-1表達(dá)量減少，并呈照射劑量依賴

5、性和時(shí)間依賴性。
　　4.與癌旁正常大腸組織相比，大腸癌組織中LncRNA-MALAT1表達(dá)量升高（P<0.05），hsa-miR-1表達(dá)量降低（P<0.001）。
　　5. LncRNA-MALAT1下調(diào)聯(lián)合照射處理組及hsa-miR-1上調(diào)聯(lián)合照射處理組與單純照射處理組相比細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖及遷移能力均明顯受到抑制，MMP-2、MMP-9及Bcl-2表達(dá)均降低，E鈣粘蛋白、Bax表達(dá)及細(xì)胞凋亡率均升高。
　　6.熒