DNA損傷標(biāo)志物γH2AX在氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形成過程中的作用研究.pdf

1、目的：
　　氧濃度變化誘導(dǎo)產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管，以往認為促血管生成因子過度表達是血管新生的原因，但DNA損傷是否與視網(wǎng)膜新生血管有關(guān)，以往無此方向研究。本研究探討參與DNA損傷修復(fù)的磷酸化蛋白γH2AX與小鼠視網(wǎng)膜新生血管的關(guān)系。
　　方法：
　　1.動物實驗
　　將C57BL/6J小鼠分為四組：正常組、氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（OIR）空白對照組、OIR陽性干擾組、O IR陰性干擾組。采用視網(wǎng)膜鋪片免疫熒光法對比觀察氧誘

2、導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形態(tài)學(xué)變化。取四組中17日齡小鼠視網(wǎng)膜組織行視網(wǎng)膜鋪片，免疫熒光法觀察對比四組視網(wǎng)膜新生血管面積和無灌注區(qū)面積大小及γH2AX表達情況。
　　2.細胞實驗
　　將人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞（HUVEC）分為四組：正常組、低氧模型空白對照組、低氧模型陽性干擾組、低氧模型陰性干擾組。細胞處理后12小時收樣，應(yīng)用免疫熒光法比較HUV EC不同組間γH2 AX的表達情況，應(yīng)用免疫印跡法定量檢測 HU VEC不同組間γH2A

3、X的表達。
　　結(jié)果：
　　1.動物實驗部分
　　視網(wǎng)膜鋪片免疫熒光結(jié)果顯示，OIR模型建立成功。四組17日齡小鼠視網(wǎng)膜新生血管面積和無灌注區(qū)面積比較，總體差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（ F=437.623、93.047，均有P<0.01），兩兩比較，OIR空白對照組、OIR模型陰性干擾組小鼠視網(wǎng)膜新生血管面積和無灌注區(qū)面積均較正常組明顯增大（LSD-t檢驗：P<0.01），OIR模型陽性干擾組小鼠視網(wǎng)膜新生血管面積和無灌注區(qū)面

4、積均較OIR空白對照組和OIR模型陰性干擾組明顯減?。↙SD-t檢驗：P<0.01）。17日齡小鼠視網(wǎng)膜γH2AX焦點團聚集出現(xiàn)情況與新生血管和無灌注區(qū)面積大小變化趨勢相一致。
　　2.細胞實驗部分
　　四組HUVEC的免疫熒光染色γH2AX焦點陽性細胞百分數(shù)，總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=64.970，P<0.01）。進一步兩兩比較，低氧模型空白對照組、低氧模型陰性干擾組γH2AX焦點陽性細胞百分數(shù)較正常組明顯增大（LSD-t

5、檢驗：P<0.01），低氧模型陽性干擾組較低氧模型空白對照組和低氧模型陰性干擾組明顯減?。↙SD-t檢驗：P<0.01）。免疫印跡法定量檢測HUVEC不同組間γH2AX的表達量與免疫熒光趨勢相一致。免疫印跡法在蛋白水平的定量檢測結(jié)果與動物實驗免疫熒光趨勢相一致。
　　結(jié)論：
　　缺氧環(huán)境下，γH2AX在小鼠視網(wǎng)膜血管和體外培養(yǎng)的 HUVEC中均大量表達。γH2AX的表達與視網(wǎng)膜血管新生有關(guān)。低氧誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)反應(yīng)可能與