ribR基因在枯草芽胞桿菌中表達(dá)的研究.pdf

1、核黃素-5-磷酸酯在生物化學(xué)中被稱為黃素單核苷酸(FMN),是核黃素的衍生物及生理活性形式之一,在細(xì)胞內(nèi)作為多種氧化還原酶的輔酶或輔基,參與細(xì)胞的多種代謝過程,具有重要的生理作用.核黃素作為商業(yè)化產(chǎn)品,已經(jīng)在醫(yī)藥、食品和飼料等行業(yè)有了廣泛的應(yīng)用.核黃素-5-磷酸酯與核黃素具有同等的生理功能,但是核黃素難溶于水,而核黃素-5-磷酸酯具有良好的水溶性.因此,核黃素-5-磷酸酯比核黃素具有更加廣泛的應(yīng)用前景. 目前核黃素-5-磷酸酯

2、的工業(yè)生產(chǎn)是通過兩步實(shí)現(xiàn):首先通過微生物發(fā)酵合成核黃素,然后以純化的核黃素為原料,再經(jīng)過單純的化學(xué)酯化反應(yīng)合成核黃素-5-磷酸酯.如果延伸核黃素發(fā)酵菌株的核黃素合成代謝途徑,一步發(fā)酵合成核黃素-5-磷酸酯,將顯著降低其生產(chǎn)成本,有利于生產(chǎn)和應(yīng)用. 枯草芽孢桿菌的ribR基因編碼單功能的黃素激酶,催化核黃素轉(zhuǎn)變?yōu)楹它S素-5-磷酸酯.ribR基因與其它未知功能基因構(gòu)成一個(gè)操縱子,調(diào)控機(jī)制未知,通常處于不表達(dá)狀態(tài).本文在大腸桿菌和枯

3、草芽孢桿菌穿梭質(zhì)粒pHP13上,連接了中等強(qiáng)度的啟動(dòng)子Pveg,構(gòu)建了表達(dá)載體pHP13-V.通過PCR擴(kuò)增了ribR基因的結(jié)構(gòu)基因部分,連接到pHP13-V上,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pHP13-VR.重組質(zhì)粒pHP13-VR.轉(zhuǎn)化核黃素生產(chǎn)菌株枯草芽孢桿菌24A1,得到了轉(zhuǎn)化子枯草芽孢桿菌25.通過培養(yǎng)和發(fā)酵觀察發(fā)現(xiàn),枯草芽孢桿菌25菌落和液體培養(yǎng)物顏色明顯低于24A1,核黃素發(fā)酵能力下降了50﹪左右,結(jié)果說明實(shí)現(xiàn)了ribR基因在24A1中的