CPAF、STING和MyD88在鼠型衣原體生殖道感染中的作用研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chiamydia trachomatis，Ct)是常見性病病原體之一，是一類活細胞內(nèi)寄生原核生物。入侵宿主后釋放最重要的蛋白因子:衣原體蛋白酶樣激活因子(Chlamydial Protease-Like Activity Factor，CPAF)，致病中發(fā)揮重要作用。干擾素基因刺激因子(stimulator of interferon genes，STING)和髓樣分化因子88(myeloid differentiatio

2、nfactor88，MyD88)都是胞內(nèi)天然免疫反應(yīng)信號通路中的重要接頭蛋白。兩者借助共同下游信號通路與衣原體感染相關(guān)，可能在其致病過程中發(fā)揮重要作用。
　　鼠衣原體(Chiamydia muridarum，mouse pneumonitis agent，MoPn)基因結(jié)構(gòu)和組成與人型Ct極為相似。因此，用MoPn建模研究Ct致病機制。
　　目的:
　　本研究體外驗證CPAF可能協(xié)助MoPn逃避胞外免疫監(jiān)視，進而選ST

3、ING-/-、MyD88-/-和C57BL/6J小鼠為對象，分別通過不同的MoPn感染途徑構(gòu)建動物模型，檢測生殖道不同組織段的MoPn播散量、陰道清除速度、病理變化，分析STING、MyD88在生殖道功能屏障中的作用，研究衣原體可能的致病機制。
　　方法:
　　(1)用T細胞、DC及OT1或OT2抗原模擬抗原遞呈過程，與不同濃度CPAF作用，ELISA分別檢測上清液中IL-2的量。
　　電泳分離及卡馬斯亮藍法，分析CP

4、AF處理及未處理衣原體抗原組電泳條帶變化。
　　分別選一種能被CPAF酶切及未能酶切的衣原體抗原代替OT2及OT1，重復(fù)抗原遞呈過程。ELISA分別檢測上清液IL-2的量。
　　(2)用2×105 IFUs MoPn經(jīng)不同途徑（陰道、宮腔、子宮遠端段及卵巢囊）感染野生型、STING-/-、MyD88-/-小鼠。不同時間點處死小鼠，一部分生殖道大體評分、H&E染色、組織和細胞免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence，

5、IF)，對比組織病變程度。
　　(3)一部分小鼠生殖道分段勻漿，IF檢測子宮-輸卵管屏障(uterotubaljunction，U-T屏障)及富頸屏障兩側(cè)衣原體量的差別。
　　結(jié)果:
　　1.CPAF選擇性抑制MHCⅡ-OT2抗原遞呈過程而非MHCⅠ-OT1(***p＜0.001)。CPAF同樣具有選擇性酶切衣原體T細胞抗原(***p＜0.001)。
　　2.經(jīng)宮頸感染，STING-/-小鼠上生殖道大體病變和顯微

6、鏡下炎癥評分比野生型更嚴重(**p＜0.01)。提示，STING可能參與U-T屏障功能。
　　3.經(jīng)宮頸感染，MyD88-/-小鼠帶菌時間明顯延長(**p＜0.01)。經(jīng)宮頸及陰道感染均顯示，MyD88-/-小鼠上生殖道組織大體和微觀病變更嚴重(**p＜0.01)。提示，宮頸屏障及U-T屏障功能都可能因MyD88缺失而受影響。
　　4.經(jīng)卵巢囊及子宮遠端段感染， C57BL/6J小鼠U-T屏障兩側(cè)衣原體量有顯著差異(*p＜0