黃芩素抑制人巨細(xì)胞病毒IE86表達(dá)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：⑴實(shí)驗(yàn)研究觀察黃芩素（baicalein，BAI）對人巨細(xì)胞病毒（HCMV）體外感染人星形膠質(zhì)細(xì)胞引起的病毒IE啟動子區(qū)域組蛋白乙?；降谋磉_(dá)變化及人星形膠質(zhì)細(xì)胞和病毒的microRNAs表達(dá)變化的影響。⑵探討黃芩素抑制HCMV IE86表達(dá)的機(jī)制，進(jìn)一步研究中藥黃芩抗HCMV感染的機(jī)制
　　方法：①人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)和病毒感染；培養(yǎng)人原代神經(jīng)干細(xì)胞，分化而得人原代星型膠質(zhì)細(xì)胞，傳代至3-4代時(shí)感染一定滴度的人巨細(xì)胞

2、病毒。②利用原代人胚肺成纖維細(xì)胞來擴(kuò)增HCMV（AD169）株病毒并確定病毒的滴度。③熒光定量PCR法檢測不同組（HCMV組、HCMV+BAI組、BAI+HCMV組）星型膠質(zhì)細(xì)胞中病毒IE mRNA的表達(dá)變化。④運(yùn)用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測BAI組、HCMV組、HCMV+BAI組、BAI+HCMV組和對照組之間HCMV IE-86啟動子區(qū)域組蛋白乙?；降谋磉_(dá)。⑤Real-Time PCR檢測BAI組、HCMV組、HCMV+BAI組、

3、BAI+HCMV組和對照組星形膠質(zhì)細(xì)胞中microRNAs(hsa-miR-200)的表達(dá)變化。⑥熒光定量PCR法檢測不同組（HCMV組、HCMV+BAI組、BAI+HCMV組）星型膠質(zhì)細(xì)胞中病毒microRNAs(miR-UL112-1)的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：⑴HCMV感染人胚胎肺成纖維細(xì)胞96h左右，約超過80％的細(xì)胞出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，呈典型的人巨細(xì)胞病毒感染后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變?？瞻邷y定結(jié)果顯示病毒空斑形成

4、的單位為3.5×108pfu/mL。⑵Real-time PCR結(jié)果顯示：在感染48h和72h時(shí)HCMV+BAI組和BAI+HCMV組IE的mRNA表達(dá)明顯低于HCMV組（P<0.05）。⑶染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：HCMV感染組可檢測到HCMV-MIEP的表達(dá)，與HCMV組相比較HCMV+BAI組、BAI+HCMV組的HCMV-MIEP的表達(dá)相對降低（P<0.05）。⑷Real-time PCR結(jié)果表明：HCMV+BAI組和BAI

5、+HCMV組microRNAs（miR-200b/c/429）的表達(dá)明顯高于HCMV組（P<0.05），且在病毒感染的24h表達(dá)量最高，48h表達(dá)量最低，72h表達(dá)量介于二者之間（P<0.05）。⑸Real-time PCR結(jié)果表明：HCMV+BAI組和BAI+HCMV組microRNAs（miR-200a/141）的表達(dá)明顯高于HCMV組（P<0.05），在病毒感染72h表達(dá)量最高。⑹熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示：HCMV+BAI組和

6、BAI+HCMV組病毒自身的microRNAs(miR-UL112-1)的表達(dá)明顯高于HCMV組（P<0.05）。
　　結(jié)論：⑴一定濃度的黃芩素能夠抑制病毒啟動子區(qū)域組蛋白的乙?；?。⑵一定濃度的黃芩素能上調(diào)人原代星型膠質(zhì)細(xì)胞中microRNAs(hsa-miR-200)的表達(dá)。⑶一定濃度的黃芩素能上調(diào)人巨細(xì)胞病毒microRNAs(miR-UL112-1)的表達(dá)。⑷一定濃度的黃芩素能降低人巨細(xì)胞病毒IE在人原代星型膠質(zhì)細(xì)胞中的