黃芩苷對小鼠巨細胞病毒肝炎的治療作用及其機制研究.pdf

1、目的：①在小鼠巨細胞病毒肝炎模型證實黃芩苷的治療作用和抗病毒效應；②探尋黃芩苷誘導抗CMV 免疫的作用及其可能環(huán)節(jié)和機制。
　　 方法：⑴黃芩苷的肝毒性實驗：根據成人的中效劑量計算小鼠用藥劑量為60 mg/kg，按等倍遞加方式設計藥物劑量梯度為60 mg/kg、120 mg/kg、240 mg/kg和480mg/kg。正常小鼠腹腔注射不同劑量黃芩苷，每天1 次，連續(xù)14天后檢測小鼠血清谷丙轉氨酶水平及肝組織病理變化，觀察黃芩苷肝

2、毒性作用；⑵動物模型建立：按照徐翼的方法，選擇4.5周齡BALB/c 小鼠腹腔接種在免疫抑制小鼠體內增毒的MCMV Smith 株，建立MCMV 播散性感染模型。在MCMV 接種后24 小時開始給予黃芩苷腹腔注射60mg/kg，每天1 次，共14天；設立安慰劑對照組和正常對照組；⑶肝病變評估：于給藥后3、7和14天觀察肝臟組織病變，用肝組織病變活動性積分（HAI）評估肝組織病變，同時檢測血清sALT 反映肝細胞功能變化；⑷病毒學評估：用

3、蝕斑法測定黃芩苷治療14天唾液腺組織內感染性病毒量，并與安慰劑對照組比較；⑸Th1/Th2 類細胞因子表達：分別于給藥后3、7和14天取小鼠脾細胞，經刀豆素、滅活MCMV 刺激體外培養(yǎng)48 小時，收集脾細胞培養(yǎng)上清液，用雙抗體夾心ELISA 法檢測上清中Th1 類細胞因子IFN-γ水平，設立不加刺激物對照組。同時檢測各時間點小鼠血清中Th2 類細胞因子IL-4水平；⑹Th1和Th2細胞特異性轉錄因子TBX21和GATA-3 蛋白表達：按

4、上述時間點提取脾組織蛋白，用Western blot 法檢測Th1和Th2細胞特異性轉錄因子TBX21和GATA-3表達強度，設立內參蛋白，以校正值K 進行半定量分析。
　　 結果：①黃芩苷的肝毒性作用：60mg/kg，120 mg/kg，240 mg/kg和480 mg/kg 腹腔注射黃芩苷共14天，未見小鼠死亡，未出現其他異常反應。各組小鼠血清ALT水平與正常對照組相比無明顯差異，肝臟切片亦無明顯異常病理變化；②肝功能改變：

5、與正常對照組相比，安慰劑對照組小鼠ALT水平在3天時明顯升高，7天時達高峰，14天時下降。與安慰劑組相比，黃芩苷治療組ALT水平在3天時即有明顯下降，7天時進一步下降，14天時接近正常；③肝組織病理改變：安慰劑對照組肝組織HAI 均值在第3天達高峰，以后逐漸下降；黃芩苷治療組肝組織HAI 均值也在第3天達高峰，但肝損害明顯輕于安慰劑對照組，以后肝病變逐漸減輕，在第7天和14天時HAI 均值都顯著低于安慰劑對照組；④唾液腺感染性病毒量變化

6、：黃芩苷治療14天時，小鼠唾液腺的感染性病毒量明顯低于安慰劑對照組；⑤Th1 類細胞因子表達：黃芩苷治療組和安慰劑對照組脾細胞上清中IFN-γ都在7天時達高峰，在3天、7天和14天時都高于正常對照組水平，有統(tǒng)計學差異。與安慰劑組比較，黃芩苷治療組在3天和7天時都顯著高于安慰劑對照組，但到14天時，黃芩苷治療組已明顯低于安慰劑組；⑥Th2 類細胞因子表達：安慰劑對照組3天時血清IL-4 顯著低于正常對照組，第7天升至正常水平；到第14天顯

7、著高于正常對照組。黃芩苷治療組IL-4水平在3天時亦明顯低于正常對照組；第7天達高峰，略高于正常對照組，但明顯高于安慰劑組；第14天仍略高于正常對照組，但明顯低于安慰劑組。⑦TBX21 蛋白表達：安慰劑對照組3天時TBX21 蛋白表達略低于正常對照組；但7天和14天時都明顯高于正常對照組；黃芩苷治療組3天時TBX21 蛋白表達顯著高于正常對照組及安慰劑組；7天時達高峰，14天時略有下降，亦都明顯高于正常對照組，但與安慰劑組接近；⑧GAT

8、A-3 蛋白表達：安慰劑組和黃芩苷治療組3天時GATA-3 蛋白表達都顯著低于正常對照組；但在7天和14天時都接近正常對照組表達水平，而黃芩苷治療組與安慰劑組之間比較無明顯差異。
　　 結論：⑴使用高達8倍中效劑量的黃芩苷對小鼠肝臟組織無毒副作用，表明黃芩苷是一種安全的中藥制劑；⑵在整體水平，黃芩苷能顯著減輕MCMV感染所致肝組織病理損害，促進sALT恢復正常，減少機體唾液腺內感染性病毒量。證明黃芩苷在體內具有抗巨細胞病毒效應，