鱖魚泛素連接酶基因的克隆、表達及功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中山大學碩士學位論文鱖魚泛素連接酶基因的克隆、表達及功能研究姓名：張慧申請學位級別：碩士專業(yè)：水生生物學指導教師：何建國20070609張慧中山大學碩士學位論文少。進行了鱖魚E3的大腸桿菌原核表達。以pGEX4T1原核表達載體成功構(gòu)建了pGEXE3質(zhì)粒并分別轉(zhuǎn)化BL21(DE3)后獲得了目的蛋白的高效表達，且表達蛋白可溶性良好。蛋白印跡實驗證實了正確表達了目的蛋白為了進一出研究該基因的功能，采用經(jīng)典的體外泛素化實驗，驗證該E3泛素連接酶

2、的活性采用UbcH2，UbcH3，UbcH5aUbcH5cUbcH7，UbcH9UbcHl0，UbcHl2E2MFC鱖魚E2)8種不同類型的泛素聚合酶E2與該E3進行體外泛素化實驗，發(fā)現(xiàn)其可以與UbcH5a以及UbcH7協(xié)作完成體外泛素化；另外還跟鱖魚的自身的泛素聚合酶E2作用，并且兩者之問體外泛素化作用最強這些結(jié)果表明該蛋白具有E3泛素連接酶活性。本文首次從鱖魚中獲得E3全長eDNA序列，并證明了其泛素連接酶活性。uPP途徑是生命活動

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