肝臟星狀細胞在大鼠原位肝移植免疫耐受誘導(dǎo)機制中的作用.pdf

1、目前器官移植面臨的主要問題是:(1)盡管移植器官短期存活十分理想但慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生率仍然很高;(2)長期免疫抑制劑的使用除給患者帶來生活上的不便及經(jīng)濟上的壓力之外,還會產(chǎn)生較嚴(yán)重的副作用.自從在動物模型上發(fā)現(xiàn)自發(fā)免疫耐受現(xiàn)象以來,特異性誘導(dǎo)移植器官或組織的免疫耐受一直是移植學(xué)家的研究目標(biāo).肝臟移植具有免疫特殊性:(1)大多數(shù)實驗動物肝臟移植模型均有自發(fā)耐受發(fā)生;(2)人類肝臟移植物對排斥反應(yīng)的易感性大大低于其他器官移植物;(3)肝臟移

2、植與其他器官移植同時施行可延長其他移植物的存活時間;(4)大約25﹪肝移植受者可完全撤用免疫抑制劑.肝臟作為免疫特惠器官的重要原因是存在樹突狀細胞(DCs)、枯否氏細胞(KCs)、竇內(nèi)皮細胞(LSECs)等特異性免疫耐受細胞,而肝臟星狀細胞(HSCs)作為免疫耐受細胞的地位還未被完全確定.本研究旨在揭示肝臟星狀細胞是否為特異性免疫耐受細胞及其誘導(dǎo)肝臟移植免疫耐受的機制. 材料與方法： 1.動物模型:建立大鼠肝移植模型;

3、 2.動物分組:本實驗分兩組,每組5對大鼠; (1)移植耐受組:Lewis大鼠(供體)-DA大鼠(受體); (2) 移植排斥組:DA大鼠(供體)-Lewis大鼠(受體); (3) 兩組移植大鼠于移植術(shù)后7天取材檢測; 3.移植大鼠HSCs的提取和鑒定: 4.移植大鼠脾臟TLCs的制備; 5.激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)及流式細胞儀(FCM)檢測肝臟HSCs與TLCs共孵育后 TLCs的凋亡;

4、 6.FCM檢測肝臟HSCs表面FasL的表達; 7.FCM檢測抗FasL抗體對HSCs促使TZCs凋亡的抑制作用: 8.Western blot檢測肝臟HSCs與TLCs共培養(yǎng)后酪氨酸磷酸化水平蛋白變化; 9.RT-PCR檢測肝臟星狀細胞FasL mRNA、B7-HI mRNA和脾臟T淋巴細胞FasmRNA水平變化; 10.ELISA檢測肝臟HSCs與脾臟TLCs共孵育后上清細胞因子IL-2、TNF-α、Ⅱ-1

5、0、TGF-β的變化; 11.移植肝臟病理組織學(xué)檢查; 12.免疫組織化學(xué)檢測大鼠移植肝臟α-SMA的表達; 13.統(tǒng)計學(xué)方法:數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用t檢驗.以P<0.05為差異有顯著性. 結(jié)論: 肝臟移植耐受組肝星狀細胞通過Fas/FasL途徑及B7-H1途徑介導(dǎo)T淋巴細胞凋亡;耐受組肝星狀細胞可促使Th2/Th3型細胞因子分泌增加:耐受組HSCs促使T淋巴細胞凋亡是通過酪氨酸磷