分化抑制因子1基因?qū)MP-2促進(jìn)兔椎間盤軟骨終板細(xì)胞軟骨特性基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討通過(guò)慢病毒干擾細(xì)胞分化抑制因子1基因表達(dá)，對(duì)BMP-2增加兔椎間盤軟骨終板細(xì)胞軟骨特異性基因Ⅱ型膠原、aggrecan表達(dá)的影響。
　　方法：兔椎間盤軟骨終板組織從新西蘭大白兔獲取，分離并培養(yǎng)軟骨終板細(xì)胞，使用第2代軟骨終板細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。使用綠色熒光蛋白慢病毒（GFP LV）、高表達(dá)Id1基因慢病毒(Id1+LV)及RNA干擾Id1基因慢病毒分別轉(zhuǎn)染二代軟骨終板細(xì)胞，通過(guò)熒光顯微鏡了解慢病毒轉(zhuǎn)染情況,RT-PCR及Wes

2、tern blot法檢測(cè)慢病毒轉(zhuǎn)染兔軟骨終板情況，不同慢病毒轉(zhuǎn)染對(duì)兔軟骨終板細(xì)胞Id1 mRNA表達(dá)和Id1蛋白合成的影響。RNAi Id1、高表達(dá)Id1慢病毒分別和BMP-2慢病毒共同轉(zhuǎn)染軟骨終板細(xì)胞，并設(shè)置BMP-2慢病毒轉(zhuǎn)染組、空載慢病毒轉(zhuǎn)染組對(duì)照，采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（RT-PCR）、ELISA法觀察軟骨終板內(nèi) Id1表達(dá)上調(diào)或下降，Id1蛋白合成差異對(duì) BMP-2上調(diào)椎間盤終板軟骨終板細(xì)胞合成Ⅱ型膠原和aggrecan的作

3、用。
　　結(jié)果：
　?。?）慢病毒轉(zhuǎn)染兔軟骨終板后與原代對(duì)比，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變，高表達(dá)Id1 LV和RNAi Id1 LV能有效轉(zhuǎn)染兔軟骨終板細(xì)胞，并干擾內(nèi)源性Id1基因的表達(dá)。
　?。?）BMP-2 LV和高表達(dá)Id1 LV共同轉(zhuǎn)染兔軟骨終板細(xì)胞后，COLⅡ、aggrecan mRNA表達(dá)和蛋白合成均顯著高于BMP-2 LV、高表達(dá)Id1 LV單獨(dú)轉(zhuǎn)染，比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）終板細(xì)