揉髕手法對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過手術(shù)方法建立新西蘭兔右膝關(guān)節(jié)骨內(nèi)高壓型骨性關(guān)節(jié)炎，分組進(jìn)行手法治療或玻璃酸鈉關(guān)節(jié)內(nèi)注射等干預(yù)模型，造模后8周末處死所有動(dòng)物，取右膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨組織，采用HE染色光鏡下檢測(cè)軟骨組織的變化，原位末端標(biāo)記法檢測(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的凋亡率，采用免疫組化法檢測(cè)軟骨細(xì)胞增殖率,檢測(cè)數(shù)據(jù)通過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以探討：(1)揉髕手法對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響。(2)揉髕手法對(duì)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響，及手法治療的可能作用機(jī)制。(3

2、)揉髕手法治療緩解兔膝關(guān)節(jié)軟骨組織退行性改變的作用機(jī)理，發(fā)掘中醫(yī)―治未病的價(jià)值和優(yōu)勢(shì)。
　　方法：隨機(jī)將50只新西蘭兔分為手法組、藥物組、模型組、假模組和正常組，每組10只;前3組手術(shù)結(jié)扎相關(guān)的血管造成骨內(nèi)高壓型骨性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，假模組手術(shù)但不損傷相應(yīng)血管，正常組不做任何處理。手法組每只兔揉髕手法治療17次，藥物組膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射玻璃酸鈉注射液5次，其他兔無特殊處理。造模后8周末處理所有動(dòng)物，取右膝內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)軟骨組織，采用HE染色

3、光鏡下檢測(cè)軟骨組織的變化，原位末端標(biāo)記法檢測(cè)軟骨細(xì)胞凋亡率，免疫組化法檢測(cè)軟骨細(xì)胞凋亡基因Bcl－2、Bax、Fas表達(dá)率，數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：軟骨組織病理學(xué)變化，肉眼觀察可見：假模組和正常組：關(guān)節(jié)軟骨表面光滑完整,呈乳白色或淡藍(lán)色，半透明狀；模型組：關(guān)節(jié)軟骨面可見蟲蝕樣斑點(diǎn),表面粗糙,不光潔,軟骨透明度降低；手法組和藥物組：關(guān)節(jié)軟骨面光滑,呈乳白色、色澤黯淡。HE組織染色后觀察到手法組：軟骨表面光滑平整，四層結(jié)構(gòu)基本清

4、晰。軟骨層增厚，表、中層細(xì)胞增多，排列稍紊亂，并出現(xiàn)簇狀增生細(xì)胞團(tuán)。潮線完整清晰。藥物組：大部分軟骨表面光滑平整，局部可見小裂隙，四層結(jié)構(gòu)基本清晰。軟骨層增厚，表、中層細(xì)胞增多，排列稍紊亂，并出現(xiàn)簇狀增生細(xì)胞團(tuán)。潮線尚存，但部分稍模糊或出現(xiàn)雙潮線。模型組：軟骨表面局部凹凸不平，缺損及裂隙易見，四層正常結(jié)構(gòu)消失。軟骨層明顯變薄，軟骨細(xì)胞減少，大小不等，簇集現(xiàn)象明顯，排列紊亂，并可見灶性崩解、壞死，嗜酸性小體多見。潮線多數(shù)消失。假模組：軟骨

5、表面不光滑，可見缺損及骨贅形成。四層結(jié)構(gòu)紊亂。軟骨細(xì)胞部分呈灶性崩解、壞死，嗜酸性小體散在分布。部分軟骨層增厚，表、中層細(xì)胞增多，排列紊亂，有簇狀增生。潮線大部分不完整或出現(xiàn)雙潮線?？瞻捉M：軟骨表面光滑平整，表層、中間層、柱狀細(xì)胞層及鈣化層四層結(jié)構(gòu)清晰。細(xì)胞大小一致，排列規(guī)整。潮線完整清晰。相關(guān)基因表達(dá)手法組Bcl－2表達(dá)(34.20±12.99)％，模型組(19.00±5.34)%(兩組比較P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義);手法組Bax