Id1基因對BMP-2維持兔髓核細胞軟骨特性的影響.pdf

1、目的：構建過表達和沉默Id1基因的慢病毒載體，以兔椎間盤髓核細胞為研究對象，觀察經(jīng)BMP-2誘導后的髓核細胞內(nèi)Id1基因的表達水平調整以后細胞分泌軟骨特性因子的變化，研究Id1在BMPs維持椎間盤細胞軟骨表型中的作用。
　　方法：（1）設計針對Id1基因過表達和RNA干擾(RNAi)的序列，應用基因重組技術將目的基因片段連接到慢病毒載體，然后感染293T細胞之后進行測序鑒定與病毒滴度檢測；（2）以兩種慢病毒分別感染兔髓核細胞，QR

2、T-PCR和Western blot檢測髓核細胞Id1 mRNA和蛋白質的表達；（3）重組腺病毒AdBMP2感染髓核細胞后，利用已制備的兩種慢病毒再次感染細胞，QRT-PCR、ELISA檢測細胞表達軟骨特性分子的能力與變化趨勢。
　　結果：（1）成功構建Id1基因過表達與RNAi慢病毒載體，測序結果與Id1基因序列比對后確認一致。（2）慢病毒感染髓核細胞后，Id1基因的mRNA與蛋白的表達量與正常細胞組及空載病毒感染組比，過表達組

3、增加，RNAi組下降，符合預期結果。（3）細胞內(nèi)Id1的表達增加可促進軟骨特性因子colⅡ（0.407±0.083）和ACAN（0.284±0.074）的mRNA表達。（4）AdBMP2處理細胞后，Id1基因表達增加可使colⅡ（0.590±0.072）和ACAN（0.351±0.066）的mRNA表達進一步顯著升高；Id1表達降低時，以上因子的表達被明顯抑制(colⅡ:0.244±0.060, ACAN:0.168±0.034)。