沉默高爾基體磷蛋白-3抑制胃癌細胞侵襲遷移及其機制研究.pdf

1、目的：沉默高爾基體磷蛋白-3基因在胃癌細胞株中的表達，觀察其對胃癌細胞侵襲、遷移的影響，探討mTOR/STAT3信號通路在上述過程中的作用及機制。
　　方法：構建高爾基體磷蛋白-3基因RNA干擾慢病毒載體和慢病毒陰性對照載體，用慢病毒法轉(zhuǎn)染胃癌細胞SGC-7901，在熒光顯微鏡下觀察慢病毒轉(zhuǎn)染后胃癌細胞內(nèi)綠色熒光蛋白(GFP)的表達情況。采用實時熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR，qPCR)和蛋白

2、印跡(Western Blotting，wB)法分別檢測GOLPH3在空白對照組(未轉(zhuǎn)染慢病毒的胃癌細胞SGC-7901)、陰性對照組（轉(zhuǎn)染空載載體的胃癌細胞SGC-7901）和GOLPH3-siRNA組（轉(zhuǎn)染GOLPH3-siRNA載體的胃癌細胞SGC-7901）中的基因水平和蛋白水平的表達;應用Transwell小室和Matrigel基質(zhì)膠檢測GOLPH3基因沉默后胃癌細胞侵襲、遷移能力的變化;Western blotting法檢測

3、各組細胞mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表達水平。
　　結果：成功建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的胃癌細胞SGC-7901，轉(zhuǎn)染效率接近90％，在體外能夠長期穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白;GOLPH3-siRNA組GOLPH3 mRNA的相對表達量均低于陰性對照組和空白對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而陰性對照組GOLPH3mRNA相對表達量和空白對照組相比無明顯差異（P＞0.05

4、）;空白對照組、陰性對照組、GOLPH3-siRNA組中GOLPH3蛋白表達量分別為:0.91±0.09，0.90±0.04，0.38±0.05，GOLPH3-siRNA組中GOLPH3蛋白表達量較兩對照組明顯降低，差別有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)，而空白對照組與陰性對照組GOLPH3蛋白表達量無明顯差異(P＞0.05); Transwell小室侵襲實驗顯示GOLPH3-siRNA組胃癌細胞穿越Matrigel基質(zhì)膠的細胞數(shù)(70.3

5、±8.5)，明顯低于陰性對照組(171.67±3.2)和空白對照組(167.6±11.0)，差別有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）;Transwell小室遷移實驗顯示GOLPH3-siRNA組胃癌細胞通過聚碳酸酯微孔濾膜的細胞數(shù)(82.0±3.6)，明顯低于陰性對照組(177.0±5.29)和空白對照組(174.3±4.7)，差別有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）; Western blotting檢測結果顯示，GOLPH3-siRNA組細胞中