蓽茇酰胺抑制肝癌細(xì)胞遷移-侵襲的作用及其機(jī)制.pdf

1、原發(fā)性肝癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，腫瘤死亡率居全球第三位，肝細(xì)胞性肝癌是原發(fā)性肝癌中最常見的一種類型，多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于病程中晚期，缺乏有效的治療藥物。蓽茇酰胺是從長柄胡椒中提取的具有生物活性的小分子酰胺類化合物，近期研究發(fā)現(xiàn)其對多種腫瘤細(xì)胞具有選擇性殺傷作用，是潛在的抗腫瘤藥物，但是其對肝癌細(xì)胞的作用和機(jī)制研究鮮見報(bào)道。
　　本課題用蓽茇酰胺處理肝癌細(xì)胞系（HepG2、Huh7和LM3）和小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞，通過MTT、

2、PI染色以及流式細(xì)胞儀檢測，發(fā)現(xiàn)蓽茇酰胺能殺傷肝癌細(xì)胞（IC50為10-20μM)，對正常肝細(xì)胞無明顯作用。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)蓽茇酰胺在低濃度（<10μM)時(shí)能有效抑制肝癌細(xì)胞的遷移/侵襲，提示蓽茇酰胺可能對晚期肝癌有治療作用。進(jìn)一步研究表明，蓽茇酰胺能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞內(nèi) ROS堆積，激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)和下游的MAPKs信號(hào)通路?？寡趸瘎?NAC能拮抗蓽茇酰胺殺傷肝癌細(xì)胞以及抑制肝癌細(xì)胞遷移的作用，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-PBA和MAPKs信號(hào)通

3、路抑制劑SP600125（JNK抑制劑）、SB203580（P38抑制劑）和U0126（Erk抑制劑）僅拮抗蓽茇酰胺抑制肝癌細(xì)胞的遷移，提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和MAPKs信號(hào)通路參與了蓽茇酰胺對肝癌細(xì)胞遷移的抑制作用。Western blot結(jié)果證明，蓽茇酰胺處理肝癌細(xì)胞時(shí)，抑制ROS可顯著減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和MAPKs信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制ROS和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激均可抑制MAPKs信號(hào)通路的激活。細(xì)胞免疫熒光結(jié)果證明，蓽茇酰胺處理肝癌細(xì)胞時(shí)，RO

4、S，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，MAPKs信號(hào)通路抑制劑均可顯著抑制CHOP的表達(dá)，提示 CHOP是 ROS-ER-MAPKs通路下游信號(hào)分子。Si-RNA結(jié)果證明CHOP參與了肝癌細(xì)胞遷移，并且是蓽茇酰胺的一個(gè)作用靶點(diǎn)。最后，通過小鼠皮下移植肝癌細(xì)胞（H22）構(gòu)建荷瘤模型，用蓽茇酰胺干預(yù)，發(fā)現(xiàn)蓽茇酰胺能有效抑制肝癌細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)生長，并且激活ER-MAPKs-CHOP信號(hào)通路。綜上所述，蓽茇酰胺能選擇性殺傷肝癌細(xì)胞并通過ROS-ER-MAPKs-CH