體外軟骨內(nèi)骨化Cox-2與Col10a1基因表達(dá)及軟骨細(xì)胞肥大成熟的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分：RUNX2與骨肉瘤（綜述）
　　骨肉瘤是在兒童和年輕人中最常見(jiàn)的惡性骨腫瘤，之前已有研究表明了成骨細(xì)胞的活性對(duì)骨肉瘤的腫瘤形成與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要性[99,100]。骨肉瘤以異常的骨骼形成為特征，成骨細(xì)胞在骨肉瘤及其轉(zhuǎn)移性的腫瘤組織中是主要的細(xì)胞類(lèi)型。眾所周知，RUN X2是成骨細(xì)胞分化必不可少的轉(zhuǎn)錄因子，RUNX2基因可能與骨肉瘤的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，它通過(guò)調(diào)控骨母細(xì)胞的細(xì)胞周期，使骨母細(xì)胞轉(zhuǎn)變成骨肉瘤細(xì)胞。RUN X2與人類(lèi)的

2、許多(骨)腫瘤和腫瘤的骨轉(zhuǎn)移有關(guān)。我們討論了利用人骨肉瘤細(xì)胞系異種移植和腫瘤抑制基因p53和Rb1建立起來(lái)的多種小鼠骨肉瘤模型中Runx2基因的潛在效應(yīng)。最后我們更新了一些microRNA的研究以及它們?cè)诠侨饬龅陌l(fā)病中與RUNX2的關(guān)聯(lián)。
　　第二部分：體外軟骨內(nèi)骨化Cox-2與Col10a1基因表達(dá)及軟骨細(xì)胞肥大成熟的相關(guān)性研究
　　研究背景：
　　在肥大型軟骨細(xì)胞中，十型膠原蛋白基因（Col10a1）特異性高表達(dá)。

3、Col10a1基因變異或異常表達(dá)通常都伴發(fā)異常的軟骨成熟或肥大從而導(dǎo)致多種骨骼疾病。本實(shí)驗(yàn)室此前的研究表明，Runx2是介導(dǎo)小鼠Col10a1基因特異表達(dá)的必需轉(zhuǎn)錄因子。我們最近的研究發(fā)現(xiàn)還有多種潛在的Col10a1基因調(diào)節(jié)因子，其中包括環(huán)氧化酶2（Cox-2）。我們推測(cè)Cox-2可能在體外通過(guò)上調(diào)軟骨細(xì)胞成熟分化相關(guān)的標(biāo)志基因，如Runx2等，從而增強(qiáng)Col10a1基因的表達(dá)以及促進(jìn)軟骨細(xì)胞肥大成熟。
　　研究目的：
　　

4、利用不同的小鼠軟骨細(xì)胞模型，探討Cox-2影響Col10a1基因表達(dá)及軟骨細(xì)胞發(fā)育成熟的體外功能。
　　研究方法：
　?。?）應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)Cox-2和Col10a1基因在小鼠MCT細(xì)胞和ATDC5細(xì)胞中的表達(dá)。MCT細(xì)胞和ATDC5細(xì)胞根據(jù)培養(yǎng)條件的不同分為增殖型和肥大型軟骨細(xì)胞。肥大型軟骨細(xì)胞中Cox-2和Col10a1基因的表達(dá)明顯升高。
　?。?）應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染和藥物干預(yù)技術(shù)，在MCT細(xì)胞和ATDC5

5、細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或抑制Cox-2的表達(dá)，以研究其對(duì)Col10a1基因表達(dá)、軟骨細(xì)胞分化成熟及其相關(guān)標(biāo)志基因的調(diào)控作用。
　　研究結(jié)果：
　　（1）熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明：和增殖型軟骨細(xì)胞比較，Cox-2在MCT和ATDC5兩種肥大型軟骨細(xì)胞的表達(dá)都顯著升高。其結(jié)果與 Col10a1基因的表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　?。?）我們?cè)贛CT細(xì)胞和ATDC5細(xì)胞中抑制Cox-2的表達(dá)，結(jié)果導(dǎo)致Col10a1的mRNA和蛋白水平均

6、顯著降低，而過(guò)表達(dá)Cox-2則顯著提高Col10a1的表達(dá)，表明Cox-2對(duì)于Col10a1的正向調(diào)控作用?；虮磉_(dá)分析和堿性磷酸酶等細(xì)胞染色結(jié)果表明Cox-2促進(jìn)軟骨細(xì)胞的肥大成熟分化，可能與其上調(diào)Runx2等其它與軟骨成熟相關(guān)的標(biāo)志基因的表達(dá)相關(guān)。
　　研究結(jié)論：
　　Cox-2與兩種軟骨細(xì)胞模型中Col10a1基因的高表達(dá)呈正相關(guān)。Cox-2促進(jìn)軟骨細(xì)胞肥大與成熟分化。Cox-2可能與Runx2等多種轉(zhuǎn)錄因子一起構(gòu)成調(diào)