體外軟骨內骨化Cox-2與Col10a1基因表達及軟骨細胞肥大成熟的相關性研究.pdf

1、第一部分：RUNX2與骨肉瘤（綜述）
　　骨肉瘤是在兒童和年輕人中最常見的惡性骨腫瘤，之前已有研究表明了成骨細胞的活性對骨肉瘤的腫瘤形成與遠處轉移的重要性[99,100]。骨肉瘤以異常的骨骼形成為特征，成骨細胞在骨肉瘤及其轉移性的腫瘤組織中是主要的細胞類型。眾所周知，RUN X2是成骨細胞分化必不可少的轉錄因子，RUNX2基因可能與骨肉瘤的發(fā)病機制有關，它通過調控骨母細胞的細胞周期，使骨母細胞轉變成骨肉瘤細胞。RUN X2與人類的

2、許多(骨)腫瘤和腫瘤的骨轉移有關。我們討論了利用人骨肉瘤細胞系異種移植和腫瘤抑制基因p53和Rb1建立起來的多種小鼠骨肉瘤模型中Runx2基因的潛在效應。最后我們更新了一些microRNA的研究以及它們在骨肉瘤的發(fā)病中與RUNX2的關聯(lián)。
　　第二部分：體外軟骨內骨化Cox-2與Col10a1基因表達及軟骨細胞肥大成熟的相關性研究
　　研究背景：
　　在肥大型軟骨細胞中，十型膠原蛋白基因（Col10a1）特異性高表達。

3、Col10a1基因變異或異常表達通常都伴發(fā)異常的軟骨成熟或肥大從而導致多種骨骼疾病。本實驗室此前的研究表明，Runx2是介導小鼠Col10a1基因特異表達的必需轉錄因子。我們最近的研究發(fā)現(xiàn)還有多種潛在的Col10a1基因調節(jié)因子，其中包括環(huán)氧化酶2（Cox-2）。我們推測Cox-2可能在體外通過上調軟骨細胞成熟分化相關的標志基因，如Runx2等，從而增強Col10a1基因的表達以及促進軟骨細胞肥大成熟。
　　研究目的：
　　

4、利用不同的小鼠軟骨細胞模型，探討Cox-2影響Col10a1基因表達及軟骨細胞發(fā)育成熟的體外功能。
　　研究方法：
　?。?）應用熒光定量PCR技術檢測Cox-2和Col10a1基因在小鼠MCT細胞和ATDC5細胞中的表達。MCT細胞和ATDC5細胞根據(jù)培養(yǎng)條件的不同分為增殖型和肥大型軟骨細胞。肥大型軟骨細胞中Cox-2和Col10a1基因的表達明顯升高。
　?。?）應用基因轉染和藥物干預技術，在MCT細胞和ATDC5

5、細胞中過表達或抑制Cox-2的表達，以研究其對Col10a1基因表達、軟骨細胞分化成熟及其相關標志基因的調控作用。
　　研究結果：
　?。?）熒光定量PCR技術檢測結果表明：和增殖型軟骨細胞比較，Cox-2在MCT和ATDC5兩種肥大型軟骨細胞的表達都顯著升高。其結果與 Col10a1基因的表達水平呈正相關。
　?。?）我們在MCT細胞和ATDC5細胞中抑制Cox-2的表達，結果導致Col10a1的mRNA和蛋白水平均

6、顯著降低，而過表達Cox-2則顯著提高Col10a1的表達，表明Cox-2對于Col10a1的正向調控作用?；虮磉_分析和堿性磷酸酶等細胞染色結果表明Cox-2促進軟骨細胞的肥大成熟分化，可能與其上調Runx2等其它與軟骨成熟相關的標志基因的表達相關。
　　研究結論：
　　Cox-2與兩種軟骨細胞模型中Col10a1基因的高表達呈正相關。Cox-2促進軟骨細胞肥大與成熟分化。Cox-2可能與Runx2等多種轉錄因子一起構成調