松蘿酸對(duì)腫瘤血管生成及bFGFR1-HSPG介導(dǎo)的信號(hào)通路影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究松蘿酸對(duì)腫瘤血管及bFGFR1/HSPG介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響，探討松蘿酸對(duì)腫瘤血管生成影響，為松蘿抗腫瘤臨床應(yīng)用及松蘿酸抑制腫瘤血管生成新藥研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：選取松蘿酸為受試物，以H22荷瘤小鼠模型作為受試對(duì)象，通過(guò)HE染色腫瘤組織切片，免疫組織化學(xué)檢測(cè)病理指標(biāo)MVD，ELISA法檢測(cè)小鼠血清中的VEGF、bFGF表達(dá)。WB免疫印跡法檢測(cè)PCNA表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)bFGFR1、HSPG mRNA表

2、達(dá)，研究松蘿酸在體實(shí)驗(yàn)中對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和血管生成的影響，并初步探討其作用機(jī)制。通過(guò)CCK-8法研究不同濃度松蘿酸對(duì)HUVEC增殖影響，初步確定最佳松蘿酸給藥濃度；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)松蘿酸對(duì)HUVEC周期和凋亡率的影響，ELISA法檢測(cè)HUVEC VEGF、bFGF分泌水平，采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)HUVEC的bFGFR1、HPSG mRNA表達(dá)，及通過(guò)WB測(cè)定PCNA、bcl-2、Bax表達(dá)。
　　結(jié)果：在體實(shí)驗(yàn)中，松蘿酸組小鼠腫瘤體

3、積、質(zhì)量增長(zhǎng)速度較模型組緩慢（P<0.05），小鼠腫瘤組織的HE染色結(jié)果顯示松蘿酸組小鼠腫瘤組織的病理?yè)p害程度明顯低于模型組，同時(shí)免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示松蘿酸組的腫瘤組織MVD（陽(yáng)性相對(duì)區(qū)域160249±1256）顯著減少（P<0.05），分子水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，WB法檢測(cè)顯示松蘿酸組PCNA蛋白表達(dá)明顯低于模型組（P<0.05）。松蘿酸可顯著降低小鼠血清bFGF和VEGF表達(dá)水平（P<0.01），RT-PCR檢測(cè)顯示松蘿酸組bFGF受體bF

4、GFR1、HSPG基因表達(dá)明顯低于模型組。此外，體外實(shí)驗(yàn)中，CCK-8法實(shí)驗(yàn)得出松蘿酸可顯著抑制HUVEC增殖，并且可促進(jìn)HUVEC凋亡，WB法檢測(cè)顯示松蘿酸組PCNA、bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于模型組，Bax蛋白表達(dá)水平明顯高于模型組，并且可促進(jìn)HUVEC凋亡，ELISA結(jié)果顯示松蘿酸可顯著降低HUVEC上清培養(yǎng)基bFGF和VEGF濃度（P<0.01），RT-PCR法研究松蘿酸對(duì)HUVEC bFGF兩個(gè)受體的影響，檢測(cè)顯示松蘿酸組bF