GLP-2對小腸淤血再灌注損傷作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　原位肝移植術(shù)(Orthotopic Liver Transplantation，OLT)是治療急、慢性重型肝炎，肝硬化肝功能失代償?shù)冉K末期肝病的最有效治療手段。肝移植后，新型免疫抑制劑的使用減少了移植后排斥反應(yīng)的發(fā)生率，卻增加了病人發(fā)生感染和癌癥的可能。同時，肝移植手術(shù)無肝期阻斷了門靜脈，腸系膜上靜脈回流受阻，造成小腸粘膜淤血，開放血流后，淤血小腸血流恢復(fù)正常，小腸經(jīng)歷再灌注，上述肝移植過程中不可避免出現(xiàn)的小腸淤血再灌

2、注損傷的病理生理學(xué)過程，可導(dǎo)致腸粘膜細(xì)胞的凋亡，屏障功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)菌移位。肝移植術(shù)后的腸源性感染易引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合癥(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)甚至原發(fā)性移植肝無功能(primary non-function，PNF)及多器官功能障礙綜合癥(multiple organdysfunction syndyrome，MODS)，是阻礙受體及移植肝存活率提高的重要因素。

3、
　　胰高血糖素樣肽-2(glucagon-like peptide2，GLP-2)是具有腸道特異性作用的腸上皮生長因子。研究認(rèn)為，GLP-2能增強(qiáng)腸道屏障功能，促進(jìn)正常小腸黏膜生長，促進(jìn)腸道炎癥引起的腸黏膜損傷的修復(fù)和愈合，通過抑制細(xì)胞凋亡并促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖減輕小腸缺血/再灌注損傷，促進(jìn)移植小腸結(jié)構(gòu)和吸收功能的恢復(fù)。有關(guān)GLP-2對肝移植過程中小腸淤血再灌注損傷作用的相關(guān)文章尚未見報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)的目的是通過探討GLP

4、-2處理的小腸淤血再灌注模型中小腸粘膜及其線粒體的變化，說明GLP-2在減少小腸淤血再灌注損傷中的作用以及線粒體在該模型中小腸損傷、凋亡過程中的作用。為肝移植過程中小腸相關(guān)保護(hù)措施的實(shí)施提供新的可行的方法和理論支持。
　　方法：
　　選擇40只健康雄性C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為8組:①正常對照組(A);預(yù)處理組，包含:②GLP-2預(yù)處理組(B1)，③:GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注組(B2)，④:PBS預(yù)處理+淤血再灌注組(

5、B3);⑤:GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注+GLP-2治療組(C);治療組，包含⑥:淤血再灌注+GLP-2治療組(D1)，⑦:淤血再灌注+PBS治療組(D2);⑧淤血再灌注組(E)。采用夾閉-開放腸系膜上靜脈的方式（即淤血再灌注）模擬肝移植手術(shù)過程中無肝期的小腸淤血再灌注動物模型，留取小腸組織進(jìn)行檢測。檢測指標(biāo):HE染色和透射電鏡觀察小腸形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的變化;免疫組織化學(xué)染色檢測小腸增殖指標(biāo)Ki67蛋白的表達(dá)，TUNEL染色檢測小腸的凋

6、亡情況;western blot檢測小腸組織中cleaved caspase-3的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　(1)小腸淤血再灌注模型中小鼠小腸形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變:與正常對照組相比，淤血再灌注組中央乳糜管擴(kuò)張，小腸絨毛上皮細(xì)胞變性;PBS預(yù)處理+淤血再灌注組腸絨毛變短變粗，中央乳糜管擴(kuò)張，其余組小腸也有不同程度的損傷但均較PBS預(yù)處理+淤血再灌注組輕。超微結(jié)構(gòu)中，與正常對照組組相比，PBS預(yù)處理+淤血再灌注組和淤血再灌注組

7、細(xì)胞核中染色質(zhì)出現(xiàn)固縮、邊集等現(xiàn)象;線粒體方面，與正常對照組相比，PBS預(yù)處理+淤血再灌注組和淤血再灌注組線粒體出現(xiàn)明顯的腫脹，空泡變性，嵴消失等現(xiàn)象，其余組也可見線粒體損傷，但較輕。和淤血再灌注+GLP-2治療組相比，淤血再灌注+PBS治療組線粒體損傷稍重;GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注組、GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注+GLP-2治療組線粒體損傷較輕，且以GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注+GLP-2治療組組損傷最輕。
　　(2)小腸組

8、織中細(xì)胞增殖:給予GLP-2處理的各組和其他組相比，可見明顯的增殖。和PBS預(yù)處理+淤血再灌注組相比，GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注組小腸隱窩增殖明顯增加;淤血再灌注+GLP-2治療組小腸隱窩增殖也明顯多于淤血再灌注+PBS治療組;而GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注+GLP-2治療組小腸隱窩增殖最明顯。
　　(3)小腸組織細(xì)胞凋亡:與正常對照組相比，其余組小鼠小腸組織發(fā)生了明顯的細(xì)胞凋亡，以PBS預(yù)處理+淤血再灌注組最明顯。與PBS預(yù)處

9、理+淤血再灌注組相比，GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注組小腸組織凋亡明顯減少。和淤血再灌注+GLP-2治療組相比，淤血再灌注+PBS治療組凋亡增加但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注+GLP-2治療組小腸組織凋亡明顯減少，同兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(4)小腸組織中cleaved caspase-3的表達(dá):與正常對照組相比，其余組cleavedcaspase-3表達(dá)均增加，但以PBS預(yù)處理+淤血再灌注組最明顯。與PBS預(yù)處理

10、+淤血再灌注組相比，GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注組小腸組織cleavedcaspase-3表達(dá)量明顯減少;與淤血再灌注+PBS治療組相比，淤血再灌注+GLP-2治療組cleaved caspase-3表達(dá)減少，GLP-2預(yù)處理+淤血再灌注+GLP-2治療組cleaved caspase-3表達(dá)進(jìn)一步減少，但三者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.GLP-2減輕小腸淤血再灌注模型中腸粘膜的損傷并促進(jìn)腸上皮的增殖。
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