孔鰩軟骨多肽及泥蚶多肽的制備及活性研究.pdf

1、本文以孔鰩（Raja porosa）軟骨及泥蚶（Tegillarca granosa）為實(shí)驗(yàn)材料?？做庈浌遣捎名}酸胍抽提、透析、丙酮分級沉淀，獲得軟骨蛋白組分；泥蚶去殼取肉，勻漿。兩者采用酶解、超濾、DEAE-52陰離子交換層析、Sephadex G-15凝膠層析和反相高效液相色譜（RP-HPLC）等技術(shù)，分別得到了孔鰩軟骨多肽和泥蚶多肽，并對其抗氧化活性和抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。
　?。?）孔鰩軟骨蛋白經(jīng)胰蛋白酶酶解和分離純化得到

2、3個活性多肽（DCPE-A， DCPE-B和 DCPE-C），經(jīng)氨基酸序列分析和質(zhì)譜（ ESI-MS）確定其結(jié)構(gòu)分別為 Phe-Ile-Met-Gly-Pro-Tyr（ DCPE-A）和 Gly-Pro-Ala-Gly-Asp-Tyr（ DCPE-B）和Ile-Val-Ala-Gly-Pro-Gln(DCPE-C），分子量分別為726.9、578.58和583.69 Da。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：DCPE-A、DCPE-B與DCPE-C

3、對DPPH自由基（EC50為3.83、4.21和4.45 mg/l）、羥自由基（EC50為3.37、3.92和4.23 mg/mL）、ABTS自由基（EC50為0.77、1.04和1.29 mg/mL）和超氧陰離子自由基（EC50為1.61、1.66和1.82 mg/mL）具有良好的清除作用，DCPE-C亦顯示出了良好的脂質(zhì)過氧化抑制作用。
　　抗腫瘤活性表明：孔鰩軟骨多肽DCPE-A，DCPE-B和DCPE-C的對人宮頸癌HeL

4、a細(xì)胞的半數(shù)抑制率（IC50）分別為4.81、4.86和6.26 mg/mL， DCPE-A顯示出最強(qiáng)的增殖抑制作用。AO/EB染色觀察顯示DCPE-A能引起腫瘤細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；通過流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果可以看出隨 DCPE-A濃度的增加，HeLa細(xì)胞的早期凋亡率從4.54％增加到19.25%；Western blotting免疫印跡表明Bcl-2/Bax的比值急劇升高，且Caspase-3的蛋白表達(dá)水平也顯著增加。研究結(jié)果表明軟骨多肽D

5、CPE-A可誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞發(fā)生凋亡，為其應(yīng)用于臨床腫瘤治療提供理論依據(jù)。
　　（2）泥蚶經(jīng)胰蛋白酶酶解和分離純化得到2個活性多肽Trp-Pro-Pro(BCP-A)和Gln-Pro（BCP-B），分子量分別為398.44和243.23 Da。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：BCP-A和BCP-B對DPPH自由基（EC501.39和3.52 mg/mL）、羥自由基（EC500.41和1.75 mg/mL）、ABTS自由基（EC500.32

6、和1.41 mg/mL）和超氧陰離子自由基（EC500.54和1.12 mg/mL）具有良好的清除作用。BCP-A比BCP-B具有更強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化能力。
　　抗腫瘤活性表明：泥蚶多肽BCP-A對前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖抑制作用高于前列腺癌DU-145細(xì)胞、肺癌H-1299細(xì)胞和宮頸癌 HeLa細(xì)胞，IC50分別為1.99、2.80、3.3和2.54 mg/mL。AO/EB染色觀察顯示BCP-A能引起腫瘤細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；通過