靈芝多糖抗腫瘤作用的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)建立 Lewis 肺癌小鼠腫瘤模型，研究靈芝多糖(GLP)在體外對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞的作用和體內(nèi)對(duì)Lewis肺癌小鼠的作用效果以及對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞Bax與P53蛋白基因表達(dá)的影響，探討靈芝多糖抗腫瘤作用的分子機(jī)制。 方法：首先進(jìn)行Lewis肺癌腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)，采用MTT法檢測(cè)GLP在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用，實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和不同濃度給藥組，測(cè)定了靈芝多糖不同濃度和不同作用時(shí)間對(duì)Lewis肺癌單層培養(yǎng)細(xì)胞的

2、作用，并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 其次通過(guò)建立Lewis肺癌小鼠腫瘤模型，對(duì)靈芝多糖在小鼠體內(nèi)抗Lewis肺癌作用的分子機(jī)制進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照組、靈芝多糖預(yù)防組、陽(yáng)性對(duì)照組及靈芝多糖注射組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，在無(wú)菌條件下，將配好的Lewis肺癌細(xì)胞懸液(濃度1.5×10<'6>/mL)，以0.2mL/只接種于兩組小鼠右上肢腋下，接種48h后，空白對(duì)照組每天注射生理鹽水0.2mL/只，靈芝多糖免疫組每天肌肉注射靈芝多

3、糖(20mg/ml)0.2mL/只，陽(yáng)性對(duì)照組每天肌肉注射生理鹽水0.2mL/只，靈芝多糖注射組每天肌肉注射靈芝多糖(20mg/ml)0.2mL/只。各組每天給藥一次，連續(xù)給藥七天。每天觀察各組小鼠的存活狀態(tài)、存活時(shí)間、體重變化情況及瘤體生長(zhǎng)情況。然后停止給藥。停藥七天后，斷頸處死小鼠，采取腫瘤和小鼠胸腺，稱(chēng)重，并計(jì)算抑瘤率、胸腺指數(shù)及荷瘤小鼠的生命延長(zhǎng)率，數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 此外，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用MTT法檢測(cè)了不同處理?xiàng)l件下

4、各組小鼠淋巴細(xì)胞的增殖功能，并采用滴片法對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能進(jìn)行了測(cè)定。 最后，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了靈芝多糖對(duì) lewis肺癌細(xì)胞抑癌基因(bax基因與p53基因)表達(dá)量的影響。 結(jié)果：靈芝多糖在體外不能抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，而靈芝多糖在小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中則能較好的抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)(p<0.05)。在應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Bax和突變P53蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)中顯示：Lewis肺癌細(xì)胞中Bax

5、和突變P53均有不同程度的表達(dá)，生理鹽水組Bax表達(dá)弱，顆粒染色淺，呈棕黃色，而突變P53蛋白高表達(dá)，顆粒染色深，呈棕褐色，集中分布；GLP組則Bax表達(dá)較生理鹽水組高，顆粒染色較深，呈棕褐色，分布較為集中，而突變P53蛋白較生理鹽水組表達(dá)弱，呈棕黃色顆粒。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，靈芝多糖抗腫瘤的分子機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞抑癌基因(bax基因與p53基因)表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。 結(jié)論：1、靈芝多糖在體外實(shí)驗(yàn)中不能抑制lewis肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。