SGK3在肝癌細胞BEL-7402中的作用及其在去甾體激素培養(yǎng)下增強肝癌細胞抗凋亡能力的研究.pdf

1、目的：構建過表達SGK3的pCDH-SGK3質粒并將其轉染構建穩(wěn)定過表達的SGK3肝癌細胞系BEL-7402，SMMC-7721，研究SGK3在肝癌細胞中對其下游信號通路的調控以及其對肝癌細胞在去甾體激素FBS中的抗凋亡能力的影響。
　　方法：（1）使用PCR擴增出SGK3基因片段，將產(chǎn)物連接到pCDH載體上，構建出pCDH-SGK3的慢病毒質粒,將其同空白對照pCDH-NC分別與慢病毒包裝載體共轉入293T細胞，包裝成慢病毒Le

2、ntivirus-SGK3和Lentivirus-NC。將此慢病毒感染肝癌細胞BEL-7402、SMMC-7721并用嘌呤霉素篩選，獲得穩(wěn)定過表達SGK3細胞株。（2） Western Blot檢測SGK3表達，CCK-8法觀察轉染后穩(wěn)定過表達SGK3肝癌細胞及其空白對照組的生長情況，以及Western Blot檢測SGK3在肝癌細胞中對下游分子GSK3β、S6的調控。（3）觀察SGK3在10％FBS以及10%去甾體激素FBS條件下的生

3、長情況，并使用Western Blot方法檢測胞內C-PARP及pS6的變化，揭示SGK3增強肝癌細胞BEL-7402在去甾體激素FBS培養(yǎng)下的抗凋亡能力。
　　結果：（1）成功構建出pCDH-SGK3重組慢病毒載體，并將此慢病毒載體及其空白對照感染至肝癌細胞系BEL-7402、SMMC-7721中并成功表達。（2）CCK-8實驗表明穩(wěn)定過表達SGK3可促進肝癌細胞的生長，但卻不能有意義地改變SMMC-7721肝癌細胞的的生長，

4、Western Blot檢測穩(wěn)定過表達SGK3的BEL-7402肝癌細胞及其空白對照組中GSK3β的磷酸化及不同濃度血清培養(yǎng)下S6的磷酸化變化，闡釋了SGK3在肝癌細胞中對其下游信號通路的影響。（3）肝癌細胞BEL-7402在去甾體激素血清中生長受到抑制，Western Blot檢測到7402細胞中有雄激素受體的表達。SGK3在去甾體激素FBS中通過對下游分子的調控增強肝癌細胞的抗凋亡能力。
　　結論：（1）在肝癌細胞BEL-74