抗菌肽ABPS1提取純化的初步研究及其與干擾素IFNa-2b融合表達載體的構(gòu)建.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文抗菌肽ABPS1提取純化的初步研究及其與干擾素IFNa-2b融合表達載體的構(gòu)建姓名：張麗申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉芃芃;劉維全20050601A b s t r a c tT h ea n t i b a c t e r i a l p e p t i d e 似B P S l ) i sa s m a l l p e p t i d e w h i c hh a s a w i d

2、 e r a n g e o fb i o l o g i c a la c t i v i t i e s s u c h a s a n t i m i c r o b i a la c t i v i t i e s ，a n t i v i r u s a n da n t i t u m o ra c t i v i t i e s ．A n di n t e r f e r o n i s a k e ym e m b e

3、ro f t h e g l y c o s y l a t e dc y t o k i n e st h a ts h a r e t h ec a p a c i t yt o i n h i b i tv i r a lr e p l i c a t i o n a n d t o e x e r te f f e c t s o ni m m u n ef u n c t i o ni nt h eh o s ti m m u

4、 n i t y ．I nt h i ss t u d y , i no r d e rt o o b t a i nt h ef u s i o np r o t e i no fI F N Q - 2 ba n dA B P S I ，t h ec o - e x p r e s s i o nv e c t o ro f1 F N n - 2 ba n dA B P S lg e n e sw a sc o n s t r u c

5、 t e da n de x p r e s s e di nE ．c o l i ．O nt h e b a s e o f h i g h e x p r e s s i o n o fA B P S l - G F P f u s i o n p r o t e i n i n K c o mt h e p u r i f i c a t i o n o fe x p r e s s i o n p r o d u c tw a

6、sp e r f o r m e d ．T h e f u s i o np r o t e i nw a sh i g h l ye x p r e s s e di n t h ef o r mo fi n c l u s i o nb o d y ．T h eb o d i e so f e n g i n e e r i n gE ．c o l iw e r eh a r v e s t e db yc e n t r i f

7、u g a t i o na n dd i s t u r b e db ys o n i c a t i o n ，t h e n i n c l u s i o n b o d yW a se x t r a c t e da n dw a s h e dw i t h b u f i e rc o n s i s t i n g o fu r e aa n d T r i t o n X ．1 0 0 f o rs e v e r

8、 a lt i m e s ．T h ei n c l u s i o nb o d yw a sd i s s o l v e d i nt h e d e n a t u r eb u f f e ru s i n gu r e aa s d e n a t u r a n t ，a n dt h e np u r i f i e d u n d e r u r e ad e n a t u r e c o n d i t i o

9、n u s i n gn i c k e lc h e l m ea f f i n i t yc h r o m a t o g r a p h ym e t h o d ．Ah i g h e rp u r i t yo f t h ed e n a t u r e di n c l u s i o nb o d y p r o t e i nw a s a t t a i n e d ，A f t e rr e n a t u r

10、 a t i o nt h r o u g hg r a d i e n td i a l y s i sm e t h o d ，a i d e a lr e n a t u r e d p r o t e i nW a s o b t a i n e d ．H o w e v e r ’t h e r ee x i s t sC N B r w h i c hi s ak i n do f t o x i na n di s d i

11、 f f i c u l t t ob u y , F u r t h e r m o r e ，i ti sf o r b i d d e ni np r o d u c t i o no f g e n ee n g i n e e r i n gp r o d u c t ．S ow ec o n s t r u c t e d P r o k a r y o t i cF u s i o nE x p r e s s i o n

12、V e c t o ro f A B P S la n d I n t e r f e r o nc t - 2 b ．T h ea n t i b a c t e r i a lp e p t i d eS h i v a - I g e n ea n d I n t e r f e r o nq - 2 bg e n ew e r es u b c l o n e d b yP e Rr e s p e c t i v e l y

13、a n d i n s e r t e d i n t op E T - 2 8 b ( 十) e x p r e s s i o n p l a s m i d i n t u r n b yr e s t r i c t i o ne n d o n u c l e a s e ．T h e nt h e m u m m e r W a sc o n s t r u c t e db ya p a i r o fi s o s c

14、h i z o m e r s ，B m n H la n dB g l I I ，w h i c hc o u l dp r o d u c et h es a m ec o h e s i v ee n d ( G A T e ) w h e n c u ti t s t a r g e tD N A s e q u e n c e , t h e i rd i g e s t e df r a g m e n t sc o u l

15、 db el i g a t e db yT 4l i g a s ea n dc o u l dn o tb e e x c i s e db yB g l I I o rB a m H I a g a i n ．T h er e c o m b i n a n tp l a s m i d sc o n t a i n i n gI F N - a - 2 ba n dt w oc o p i e so f A B P S lg e

16、 n eW a s t r a n s f o r m e di n t oE s c h e r i c h i ac o l iB L 2 1 ( D E 3 ) p l y s S a n dt h e ni n d u c e db yI P T G t o e x p r e s sf u s i o np r o t e i n ．T h em u l t i m e r so f I F Nd ·2 ba n d

17、A B P S l h a sb e e n s u c c e s s f u l l yc o n s t r u c t e db y r e s t r i c t i n ne n d o n u c l e a s ea n d d i r e c tD N As e q u e n c i n g ．T h i s b e n e f i t s p r e p a r a t i o n o fI F N a ·

18、;2 ba n dA B P S l i n a l a r g e s c a l e a n d p r o v i d e s a ne x p e r i m e n t a ld a t a f o rt h ep r o d u c t i o n o f o t h e r s m a l lb i o a c t i v ep e p f i d e s ．K e y w o r d s ：I F N a - 2 b ,