抗菌肽Lactoferricin B基因的克隆及其在大腸桿菌中的融合表達(dá).pdf

1、背景與目的LactoferricinB(簡稱LfcinB)是一類富含色氨酸的小分子抗菌肽，是牛乳鐵蛋白(bLf)在消化道內(nèi)經(jīng)胃蛋白酶水解而產(chǎn)生。同其他抗菌肽一樣，LactoferricinB具有廣譜殺菌活力，此外可能還有抑制病毒和真菌增生、抑殺腫瘤細(xì)胞等多種生物學(xué)功能，而對真核細(xì)胞幾乎沒有毒性?；谶@種選擇性效應(yīng)和無抗原性的特點，LactoferricinB有望成為新一代的抗菌、抗病毒、抗腫瘤新藥。然而，天然抗菌肽的來源十分困難，無論以

2、何種生物為來源的抗菌肽，都面臨培養(yǎng)和提取的問題，難以保證每一批次的抗菌肽有一致的生物活性，很難滿足研究和臨床應(yīng)用的需要。因此，利用分子生物學(xué)技術(shù)重組表達(dá)外源基因成為獲取目標(biāo)蛋白的最有效途徑。由于抗菌肽對細(xì)菌有很強的殺傷作用，不宜在原核系統(tǒng)中直接表達(dá)，一般的策略是采用融合表達(dá)或在真核細(xì)胞(如酵母)中進(jìn)行表達(dá)。本研究采用融合表達(dá)的方法，體外合成抗菌肽LactoferricinB基因并克隆入大腸桿菌中，重組表達(dá)LactoferricinB蛋白

3、。方法：根據(jù)LactoferricinB的氨基酸序列，采用大腸桿菌偏愛密碼子反推其基因cDNA序列，化學(xué)合成LactoferricinB基因，并將基因克隆入大腸桿菌融合表達(dá)載體pGEX-1入T，利用此載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，經(jīng)酶切分析及PCR檢測，確定陽性克隆。IPTG誘導(dǎo)陽性克隆表達(dá)，SDS-PAGE電泳觀察表達(dá)產(chǎn)物。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化及凝血酶切割，得到純度較高的抗菌肽LactoferricinB，然后檢測抗菌肽活性。結(jié)論：成