抗菌肽Lactoferricin B基因的克隆及其在大腸桿菌中的融合表達.pdf

1、背景與目的LactoferricinB(簡稱LfcinB)是一類富含色氨酸的小分子抗菌肽，是牛乳鐵蛋白(bLf)在消化道內經胃蛋白酶水解而產生。同其他抗菌肽一樣，LactoferricinB具有廣譜殺菌活力，此外可能還有抑制病毒和真菌增生、抑殺腫瘤細胞等多種生物學功能，而對真核細胞幾乎沒有毒性?；谶@種選擇性效應和無抗原性的特點，LactoferricinB有望成為新一代的抗菌、抗病毒、抗腫瘤新藥。然而，天然抗菌肽的來源十分困難，無論以

2、何種生物為來源的抗菌肽，都面臨培養(yǎng)和提取的問題，難以保證每一批次的抗菌肽有一致的生物活性，很難滿足研究和臨床應用的需要。因此，利用分子生物學技術重組表達外源基因成為獲取目標蛋白的最有效途徑。由于抗菌肽對細菌有很強的殺傷作用，不宜在原核系統(tǒng)中直接表達，一般的策略是采用融合表達或在真核細胞(如酵母)中進行表達。本研究采用融合表達的方法，體外合成抗菌肽LactoferricinB基因并克隆入大腸桿菌中，重組表達LactoferricinB蛋白

3、。方法：根據LactoferricinB的氨基酸序列，采用大腸桿菌偏愛密碼子反推其基因cDNA序列，化學合成LactoferricinB基因，并將基因克隆入大腸桿菌融合表達載體pGEX-1入T，利用此載體轉化大腸桿菌JM109，經酶切分析及PCR檢測，確定陽性克隆。IPTG誘導陽性克隆表達，SDS-PAGE電泳觀察表達產物。表達產物經親和層析純化及凝血酶切割，得到純度較高的抗菌肽LactoferricinB，然后檢測抗菌肽活性。結論：成