DC-SIGN-DC-SIGNR與EBV感染及其多態(tài)性與鼻咽癌易感性的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、目的:通過(guò)構(gòu)建不同細(xì)胞類型的Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus，EBV)感染模型，觀察細(xì)胞感染EBV后，DC-SIGN/DC-SIGNR表達(dá)的變化，研究DC-SIGN/DC-SIGNR與EBV感染的關(guān)系。通過(guò)病例-對(duì)照實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究DC-SIGN/DC-SIGNR遺傳多態(tài)性與鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)易感性的關(guān)系，為探索EBV感染上皮細(xì)胞和鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制及早期預(yù)警

2、奠定基礎(chǔ)。
　　方法:1.通過(guò)胃腺癌AGS EBV(+)細(xì)胞制備EBV，從健康志愿者外周血中分離及用細(xì)胞因子刺激分別培養(yǎng)單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，用所得EBV直接感染人外周血來(lái)源的單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及淋巴瘤細(xì)胞KMH2和鼻咽癌細(xì)胞;同時(shí)用感染了EBV的KMH2細(xì)胞與4株鼻咽癌上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，建立鼻咽癌細(xì)胞EBV感染模型。2.用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-timeQuantitative-PCR，RT-qPCR)以及In-cell W

3、estem檢測(cè)各類型細(xì)胞感染前后DC-SIGN/DC-SIGNR表達(dá)水平變化。3.利用DC-SIGN/DC-SIGNR競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑甘露聚糖，競(jìng)爭(zhēng)抑制EBV感染實(shí)驗(yàn):單核細(xì)胞加入甘露聚糖，孵育1h后，再進(jìn)行EBV感染，RT-qPCR檢測(cè)EBV感染相關(guān)分子的表達(dá)。4.用RT-qPCR分別檢測(cè)鼻咽癌組織、鼻咽粘膜慢性炎患者鼻咽粘膜組織中DC-SIGN/DC-SIGNR的mRNA表達(dá)水平差異情況。5.應(yīng)用質(zhì)譜分型及PCR、瓊脂糖凝膠電泳、測(cè)序等

4、技術(shù)檢測(cè)DC-SIGN/DC-SIGNR遺傳多態(tài)性。通過(guò)卡方檢驗(yàn)和非條件邏輯回歸分析等方法進(jìn)行相應(yīng)分析。
　　結(jié)果:1.EBV能夠直接感染外周血來(lái)源的單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞、KMH2細(xì)胞。且使用甘露聚糖競(jìng)爭(zhēng)抑制EBV感染單核細(xì)胞時(shí)，單核細(xì)胞感染率下降。感染后的單核細(xì)胞可檢測(cè)到DC-SIGN表達(dá)下調(diào)和DC-SIGNR表達(dá)上調(diào)。感染后的淋巴細(xì)胞和KMH2細(xì)胞可檢測(cè)到DC-SIGN/DC-SIGNR均表達(dá)上調(diào)。
　　2.EBV顆粒直接

5、感染鼻咽癌上皮細(xì)胞的效率低，而鼻咽癌細(xì)胞株與KMH2 EBV(+)共培養(yǎng)后能被EBV感染，且感染后的鼻咽癌細(xì)胞株可檢測(cè)到DC-SIGNR表達(dá)上調(diào)，DC-SIGN在鼻咽上皮細(xì)胞中未檢出。
　　3.鼻咽癌組織、粘膜慢性炎鼻咽粘膜組織中DC-SIGN/DC-SIGNR的mRNA表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.DC-SIGN頸區(qū)基因型和等位基因頻率在廣西健康人群和美國(guó)白人之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，和鼻咽癌患者間的

6、差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。DC-SIGNR頸區(qū)基因型和等位基因頻率在廣西健康人群和美國(guó)白人之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。DC-SIGNR頸區(qū)基因型分布頻率在廣西鼻咽癌患者和健康人群間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但是等位基因的分布頻率有明顯差異(P＜0.05)。在廣西鼻咽癌患者中9次重復(fù)等位基因占有的比例明顯高于健康人群中占有的比例。
　　5.廣西NPC組和健康對(duì)照組中DC-SIGN rs7252229位點(diǎn)基

7、因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。DC-SIGN rs7252229位點(diǎn)GC和GG基因型能夠降低NPC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，調(diào)整OR值分別為0.076倍(95％ CI:0.008-0.690，P=0.022)和0.056倍(95％CI:0.006-0.487，P=0.009)。
　　結(jié)論:1.EBV感染單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、KMH2、NPC細(xì)胞株后能夠引起DC-SIGN/DC-SIGNR的表達(dá)水平發(fā)生不同改變，因此我們推測(cè)DC-SIG