血紅素氧合酶1對黑色素瘤細胞增殖凋亡影響的機制研究.pdf

1、 Mechanism of Heme Oxygenase 1 on Proliferation and Apoptosis of Melanoma Cells A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Master’s Degree of Engineering By Zheng Chunl

2、ingg Supervised by Prof.Zhong Li Pluralistic Supervised by Prof.Huang Xi Specialty:ME(Biological engineering Field) College of Bioengineering of Chongqing University, Chongqing, China May, 2017 重慶大學碩士學位論文 中文摘要 II Western

3、 blotting 結果顯示，與對照組相比，A375 細胞中的 HO-1 過表達組其蛋白水平明顯上升，HO-1 干擾組蛋白水平降低，且細胞免疫熒光實驗顯示的熒光強度也得到了類似的結果。測序結果顯示 HO-1 發(fā)生了移碼突變且敲除成功。 2. HO-1 過表達有促進 A375 細胞增殖的作用，HO-1 干擾對 A375 細胞增殖無明顯影響，HO-1 敲除顯著降低 A375 細胞增殖 CCK8 結果表明，在 96 小時內 HO-1 過表達和

4、干擾的細胞增殖能力與對照組相比無明顯差異，HO-1 敲除的穩(wěn)定細胞系的細胞增殖與對照組細胞相比受到了明顯的抑制。 結晶紫染色結果顯示， HO-1過表達細胞增殖數(shù)量跟對照組相比有一定的增加，HO-1 干擾組細胞增殖數(shù)量較對照組無明顯差異，但是 HO-1 敲除的穩(wěn)定細胞系的細胞數(shù)量明顯比對照組少很多。裸鼠成瘤實驗結果一致顯示，HO-1 過表達有促進腫瘤生長的作用，HO-1 干擾對 A375 細胞的增殖影響并不大，但 HO-1 敲除能顯著抑制

5、 A375 細胞的增殖。 3. HO-1 對 A375 細胞遷移沒有影響 細胞劃痕實驗結果顯示， 三種不同的穩(wěn)定細胞系在 12、 24、 36、 48 小時期間，同一時間段內的細胞遷移的距離均無明顯差異， 并且沒有有效抑制 A375 細胞的遷移，說明 HO-1 對 A375 細胞的遷移能力影響不大。 4.HO-1 敲除顯著抑制 A375 細胞增殖、誘導細胞凋亡 流式細胞術的檢測結果表明，過表達 HO-1 有促進 A375 細胞增殖，抑制

6、細胞凋亡的作用，HO-1 干擾對 A375 細胞的周期凋亡均影響不大，但是 HO-1 敲除能夠顯著促進 A375 細胞的凋亡以及 S 期細胞周期阻滯，說明敲除 HO-1 后抑制了細胞的增殖。 5.HO-1 敲除激活 PI3K/AKT 信號通路 通過 Western blotting 和 Q-PCR 檢測了 PI3K、 AKT、 Bax、 P21、 等信號分子，結果顯示 HO-1 敲除的穩(wěn)定細胞系中 PI3K、AKT 等基因表達明顯降低，

7、Bax、CyclinD1 等基因表達顯著上升， 因此我推測 HO-1 主要是通過 PI3K/AKT 這條信號通路引起 A375 細胞發(fā)生周期阻滯，誘導細胞凋亡。 結論：通過眾多實驗結果發(fā)現(xiàn)，過表達 HO-1 有促進 A375 細胞增殖并抑制其凋亡的作用，干擾 HO-1 不能有效抑制 A375 細胞的增殖和促進凋亡，但敲除 HO-1能夠顯著抑制黑色素瘤細胞的增殖同時促進凋亡；其主要通過 PI3K/AKT 信號通路來調控。此外，未發(fā)現(xiàn) H