α-亞麻酸和花生四烯酸對HepG2細胞CYP7A1表達的影響及Nrf2的調控.pdf

1、非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic Fatty Liver Disease，NAFLD)是一種常見的肝臟慢性疾病，其特點是有少量或沒有飲酒史個體的肝臟細胞中出現(xiàn)過量甘油三酯(TAG)集聚或脂肪變性。NAFLD在西方國家常發(fā)，與肥胖癥，代謝綜合征和2型糖尿病等緊密關聯(lián)，并且成為肝衰竭的主要原因，通過研究發(fā)現(xiàn)，多數需要進行肝臟移植治療的病例也都有NAFLD的參與。在NAFLD的疾病進程中，脂肪酸的代謝異常會觸發(fā)機體的氧化應激和脂質過氧

2、化反應，進而誘發(fā)抗氧化反應的中樞調節(jié)者Nrf2的表達量明顯增多。核轉錄因子Nrf2可以調控細胞對抗外來異物和氧化應激引起的損傷，是調節(jié)機體內氧化還原平衡的關鍵核轉錄因子。Nrf2作為機體防御機制的關鍵中樞，可作為治療多種肝臟疾病的藥物作用靶點，如非酒精性脂肪肝炎、肝硬化、急性肝損傷以及肝癌等。同時，作為NAFLD的疾病特征，膽固醇堆積也能加重內質網應激和細胞凋亡，從而加重NAFLD程度。在肝臟中，膽固醇7α-羥化酶(cholestero

3、l7α-hydroxylase，CYP7A1)在將膽固醇轉化為膽汁酸中主要作用的經典合成途徑中，起到限速酶的作用，催化膽汁酸合成的第一步反應，從而能夠將膽固醇轉化成7α-羥化膽固醇。本實驗室前期研究結果表明，高脂誘導的小鼠發(fā)生NAFLD時藥物代謝酶CYP7A1mRNA的表達量明顯下降，而Nrf2表達量升高，且NAFLD模型小鼠肝臟伴隨α-亞麻酸(ALA)和花生四烯酸(AA)的異常升高。為了研究NAFLD疾病進程中CYP7A1 mRNA表

4、達量降低與脂肪酸代謝異常的關系，以及Nrf2是否調控CYP7A1的表達，進行了本課題的研究:首先構建Nrf2的特異性siRNA和過表達質粒，然后將Nrf2的特異性siRNA和過表達質粒通過脂質體介導的方法瞬時轉染入HepG2細胞中，建立HepG2細胞Nrf2沉默和過表達模型。在分析ALA和AA兩種脂肪酸誘導HepG2細胞對Nrf2和CYP7A1表達量影響的基礎上，研究ALA和AA誘導對Nrf2沉默和過表達細胞CYP7A1的mRNA和蛋白

5、質表達量的影響，探討脂肪酸應激刺激誘導的CYP7A1的變化與Nrf2的相關性。
　　采用MTT法確定本試驗中ALA和AA的誘導濃度為0.25mmol/L、0.5mmol/L和1 mmol/L。與空白對照組相比，脂肪酸作用誘導后，HepG2細胞Nrf2 mRNA和蛋白質的表達量增加，且成劑量依賴性;采用ALA誘導后，HepG2細胞CYP7A1 mRNA和蛋白質的表達量成劑量依賴性升高，而采用AA誘導后，HepG2細胞CYP7A1 m

6、RNA和蛋白質的表達量則成劑量依賴性降低。當轉染si-Nrf2使Nrf2沉默后，ALA和AA誘導CYP7A1 mRNA和蛋白質表達量的趨勢與對照組相同，但每個濃度作用下與對照組相比都有所升高，當轉染Nrf2過表達質粒使Nrf2過表達后，ALA和AA誘導CYP7A1 mRNA和蛋白質表達量的趨勢與對照組相同，但每個濃度作用下與對照組相比卻都有所降低。
　　以上結果表明，ALA的誘導量與HepG2細胞CYP7A1的表達量呈正相關，而A