石斛多糖對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜保護(hù)性作用的研究.pdf

1、研究目的：
　　近年來(lái)，越來(lái)越多的研究認(rèn)為炎癥作用機(jī)制在糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy DR)的早期發(fā)展中發(fā)揮著不可或缺的作用。由此推測(cè)，抗炎治療有可能成為預(yù)防DR的發(fā)展及治療提供一個(gè)新的思路。石斛作為我國(guó)傳統(tǒng)名貴中草藥之一，被認(rèn)為具有滋陰補(bǔ)腎、清肝明目的功能。多糖是石斛的主要的藥用活性成分之一，其化學(xué)成分和藥理活性作用也日益引起人們的關(guān)注，研究表明，石斛多糖具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用。本研究以糖尿

2、病大鼠為研究對(duì)象，觀察石斛多糖與糖尿病大鼠血-視網(wǎng)膜屏障功能的關(guān)系及其具體的作用機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：老鼠隨機(jī)分為5組，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：(1)正常組，(2)糖尿病組，(3)糖尿病+石斛多糖低劑量組[100mg/(kg?天)]，(4)糖尿病+石斛多糖中劑量組[200mg/(kg?天)]，(5)糖尿病+石斛多糖高劑量組[300mg/(kg?天)]。老鼠按照55mg/kg使用鏈脲佐菌素（streptozotocin，ST

3、Z）腹腔注射，正常組組大鼠腹腔注射同等劑量檸檬酸鈉溶液，以后每周監(jiān)測(cè)血糖一次。48小時(shí)血糖高于16.7mmol/L認(rèn)為造模成功。建模成功6周后，石斛多糖各處理組進(jìn)行為期8周灌胃治療。8周后，2％戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔麻醉大鼠，取所需標(biāo)本。采用蛋白印跡法(Westen Blot)檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)白介素-6（interleukin-6, IL-6）、腫瘤壞死因子-α(tumer factor-alpha,TNF-α)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)

4、因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及視網(wǎng)膜內(nèi)緊密連接蛋白家族(ZO-1、Occludin、Claudin-5)的蛋白表達(dá)水平，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EnzymeLinked Immunosorbent Assay，ELISA)檢測(cè)大鼠血清、視網(wǎng)膜內(nèi)IL-6、TNF-α的含量，免疫組化觀察大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）的表達(dá)水平，伊凡氏藍(lán)（Evans blue）染色分析糖尿病大鼠血

5、視網(wǎng)膜屏障功能。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　與正常組比較，糖尿病組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)IL-6、TNF-α、VEGF的蛋白表達(dá)增加，緊密連接蛋白(ZO-1、Occludin、Claudin-5)表達(dá)水平降低，血清IL-6、TNF-α表達(dá)增加，大鼠視網(wǎng)膜滲透量增高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與糖尿病組比較，石斛多糖低、中、高各劑量組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)IL-6、TNF-α的蛋白表達(dá)明顯降低，緊密連接蛋白(ZO-1、Occludin、Cl

6、audin-5)表達(dá)水平增高，血清IL-6、TNF-α的表達(dá)降低，石斛多糖各劑量組大鼠視網(wǎng)膜滲透量明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。石斛多糖各劑量組之間各指標(biāo)兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。免疫組化切片觀察，正常大鼠視網(wǎng)膜未見(jiàn)明顯NF-κB陽(yáng)性染色，糖尿病組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)NF-κB表達(dá)高于正常組，與糖尿病組比較，石斛多糖各劑量組NF-κB表達(dá)降低。
　　結(jié)論：
　　石斛多糖可以降低糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠