LAP+CD4+Treg細胞在結直腸癌患者外周血中的分布特征及體外研究.pdf

1、本文對LAP+CD4+Treg細胞在結直腸癌患者外周血中的分布特征進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：LAP+CD4+Treg細胞在結直腸癌患者外周血中的分布特征。
　　目的：檢測LAP+CD+Treg細胞在結直腸癌患者外周血中分布比例，并觀察其與腫瘤分期、病理類型之間的關系。
　　方法：選取40名結直腸癌患者與20名健康體檢志愿者作為研究對象。運用流式細胞技術對研究對象外周血LAP+CD+Treg細胞占C

2、D4+T細胞的比例進行檢測。分析研究對象的相關臨床資料：性別、年齡、民族、術前癌胚抗原（Carcino-embryonic antigen，CEA)水平、腫瘤直徑、腫瘤臨床分期、腫瘤分化程度等，初步探討結直腸癌患者外周血LAP+CD+Treg細胞比例分布與上述臨床資料間的關系。
　　結果：40例結直腸癌患者外周血LAP+CD4+Treg細胞占CD4+T細胞（9.35?2.87）％，高于20例健康對照組（1.52?0.69）%，t＝

3、12.275，P＝0.000。有淋巴轉移的腸癌患者LAP+CD4+Treg細胞占CD4+T細胞（11.41?2.02）%，明顯高于無淋巴轉移的腸癌患者（9.25?2.07）%，t＝3.276，P＝0.002。C、D期腸癌患者LAP+CD4+Treg細胞占CD4+T細胞（10.77?1.99）%，A、B期腸癌患者LAP+CD4+Treg細胞占CD4+T細胞（8.07?1.09）%，兩者之間差異顯著，t＝-5.376,P＝0.000。LAP

4、+CD4+Treg細胞在不同的性別、年齡、民族、腫瘤大小以及腫瘤分化程度的分組中無差異（P＞0.05）。根據(jù)Pearson相關分析顯示：腸癌患者外周血LAP+CD4+Treg細胞的比例與血清CEA水平呈正相關，r＝0.543，P＝0.006。
　　結論：結直腸癌患者外周血中LAP+CD+Treg細胞水平顯著高于健康對照組，提示其可能參與了結直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程，具有作為機體免疫狀態(tài)指標參考的潛能。LAP+CD+Treg細胞水平在淋

5、巴結轉移與否及不同腫瘤分期中存在差異，但尚不能認為其與病情嚴重程度相關。
　　第二部分：結直腸癌患者外周血LAP+CD4+Treg細胞的體外研究。
　　目的：通過體外分選結直腸癌患者外周血中的LAP+CD4+Treg細胞和LAP-CD4+T細胞，檢測并比較兩者細胞因子譜的差異，初步探討LAP+CD4+Treg細胞在結直腸癌發(fā)病機制中的作用；同時觀察IL-8對LAP-CD4+T細胞體外誘導的影響。
　　方法：收集2014

6、年11月10日至2015年2月1日廣西醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院初次行手術治療的32例結直腸癌患者的外周血，連續(xù)梯度離心法分離外周血單個核細胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMCs），再用免疫磁珠分選技術（Magnetic Cell Sorting，MACS）分選出CD+T細胞中的LAP+CD4+Treg細胞和LAP-CD4+T細胞，流式細胞術檢測分選后獲得的細胞純度；臺盼藍摻入法檢測分離前后細胞活性

7、，應用液相芯片、酶聯(lián)免疫法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent，ELISA）檢測兩種細胞培養(yǎng)上清液所含相關細胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-?、TGF-β的濃度。同時，將一定濃度IL-8添加到LAP-CD4+T細胞中培養(yǎng)72h，采用流式細胞術（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）檢測相應LAP-CD4+T細胞培養(yǎng)孔中誘導獲得的LAP+CD4+Treg細胞的比例。
　　結果：應用磁珠免

8、疫法分選獲得的LAP+CD4+Treg細胞純度為（95.14±1.67）%，LAP-CD4+T細胞純度為（95.32±2.41）%；臺盼藍摻入法結果顯示LAP+CD4+Treg細胞存活率為（92.54±2.31）%，LAP-CD4+T細胞存活率為（93.14±2.35）%；液相芯片以及ELISA檢測結果表明LAP+CD4+Treg細胞較 LAP-CD4+T細胞分泌更高濃度IL-10、TGF-β（110.65±12.45 vs.72.86

9、±10.87，t=9.13，P=0.000；107.03±17.69 vs.64.19±14.15，t=7.76，P=0.000）。加入CD3、CD8抗體及IL-2可誘導活化的LAP-CD4+T細胞只產(chǎn)生部分LAP+CD4+Treg細胞（0.48?0.54）%，但在此基礎上添加IL-8后可產(chǎn)生更多的LAP+CD4+Treg細胞（1.51?0.26）%；t=6.379，P=0.000。
　　結論：磁珠免疫法分選獲得的LAP+CD4+