siRNA抑制Cyclophilin A基因對喉鱗癌細胞Hep-2增殖、轉移及順鉑敏感性的作用.pdf

1、目的：喉癌是常見的頭頸部惡性腫瘤之一，其中喉鱗狀細胞癌（Laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC）是其最主要的病理學類型，約占99％。LSCC的發(fā)病率最近幾年有所升高。因此探索對抗喉鱗癌轉移的新策略及藥物靶點是十分必要的。親環(huán)素A(Cyclophilin A，CypA)是免疫抑制劑環(huán)孢素A（CyclosporinA，CsA）的細胞內結合蛋白。近來研究發(fā)現(xiàn)其在結腸癌、胰腺癌、肝癌等惡性腫瘤中高表達，并參

2、與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及生物學行為。前期研究發(fā)現(xiàn)CypA在喉癌組織中的表達較正常癌旁組織明顯升高，但在喉癌中的生物學作用及機制尚不清楚。本實驗利用RNA干擾技術沉默Hep-2細胞中CypA的表達，檢測其對Hep-2細胞增殖、轉移等方面的影響及其可能的分子機制。
　　方法：將化學合成的靶向CypA的siRNA（small interfering RNA，小干擾RNA）轉染喉鱗癌細胞Hep-2，同時以轉染陰性對照NC siRNA和空白細胞作

3、為對照，3組細胞分別命名為control組、NC siRNA組、CypA siRNA組。運用real-time PCR檢測各組CypA及相關基因CD147、VEGF、MMP-9的mRNA表達差異；Western blot檢測CypA、CD147、MMP-9的蛋白表達變化；ELISA方法測定Hep-2細胞培養(yǎng)上清液中VEGF蛋白含量的變化；MTT法檢測CypA對細胞生長情況及順鉑敏感性的影響；平板克隆形成實驗觀察CypA在喉癌細胞增殖中的

4、作用；流式細胞術檢測CypA對細胞周期分布的影響；Transwell法檢測CypA在喉癌細胞侵襲、遷移中的作用；血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry，VM)實驗檢測CypA對喉癌細胞血管通道形成能力的影響。
　　結果：CypA siRNA轉染后的Hep-2細胞中CypA mRNA和蛋白表達水平明顯降低（P=0.000）。沉默CypA的表達可下調CD147（P=0.000）、VEGF（P=0.001）、MMP-9（

5、P=0.000）的mRNA表達，同時可抑制Hep-2細胞VEGF的分泌和CD147、MMP-9蛋白的表達，差異均有統(tǒng)計學意義（P=0.000）。MTT結果顯示CypA siRNA轉染后的Hep-2細胞生長緩慢，且對順鉑敏感性明顯增強（P=0.000）；細胞克隆形成被抑制，control組克隆數(shù)為（235.00±23.90）、NC siRNA組為（240.67±10.07）、CypA siRNA組為（129.33±14.22）（P=0.0

6、00）；細胞周期阻滯于G1期，各組增值指數(shù)分別為control組（0.337±0.016）、NC siRNA組（0.345±0.024）、CypA siRNA組（0.191±0.005）（P=0.000）；Hep-2細胞的遷移、侵襲能力明顯降低（P=0.000）。下調CypA表達后，Hep-2細胞 VM表達降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.000）。
　　結論：CypA表達下調抑制喉癌細胞株Hep-2的增殖、遷移侵襲能力及VM表達