胡桃醌體外誘導(dǎo)LS-174T細(xì)胞凋亡機(jī)制的初步研究.pdf

1、胡桃醌是胡桃科核桃屬植物胡桃楸(Jugland mandshurica Maxim)和核桃(Juglans regia L)中存在的重要活性物質(zhì)，具有抗腫瘤、抗炎和抗菌等藥理作用。隨著化學(xué)分析分離技術(shù)的不斷提高和分子生物學(xué)技術(shù)在藥理中的應(yīng)用，胡桃醌的化學(xué)提取和藥理研究取得了一定進(jìn)展。本文主要研究了胡桃醌對(duì)LS-174T細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步考察。文中所應(yīng)用的方法包括：MTT法，熒光染色法，Western blot和蛋白

2、活性測(cè)定。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，MTT法研究表明胡桃醌對(duì)LS-174T細(xì)胞有細(xì)胞毒活性，對(duì)細(xì)胞增長(zhǎng)的抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴性；熒光染色法初步證明胡桃醌具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。胡桃醌25μM及50μM作用細(xì)胞36h后出現(xiàn)凋亡小體，為典型凋亡特征。Caspase-3活性呈劑量依賴性增加，Caspase-9活性的增加無(wú)明顯劑量依賴性；Caspase-3和Caspase-9活性均在24h達(dá)到最高，隨后呈下降趨勢(shì)；Western blot

3、結(jié)果表明：隨劑量增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)減少，促凋亡蛋白Caspase酶原剪切增多，但p53及p21表達(dá)無(wú)明顯變化；GSH和NAC可抑制胡桃醌誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，與空白組對(duì)比差異顯著(P＜0.001)，GSH和NAC對(duì)胡桃醌誘導(dǎo)的Bcl-2蛋白表達(dá)減少有恢復(fù)作用，并使Caspase酶原剪切片段減少。兒茶素，SOD，硫辛酸等其他6種還原劑，酶及抑制劑無(wú)此作用。
　　 綜上，胡桃醌抑制細(xì)胞增殖的作用機(jī)制為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，以早期凋亡為