脂多糖(LPS)誘導淋巴細胞MicroRNA表達的初步篩選.pdf

1、目的：
　　 應用基因芯片來檢測脂多糖(LPS)誘導淋巴細胞的MicroRNA的表達情況,并初步篩選出特異表達的MicroKNA。
　　 方法：
　　 本實驗分兩個階段:
　　 第一階段:選取兩株細胞分別為Jurkat細胞(T淋巴細胞白血病細胞)、CCRF-CEM細胞(人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞)。首先將兩株細胞培養(yǎng)到成熟階段,每種細胞接種四個培養(yǎng)皿,每種細胞其中兩個培養(yǎng)皿加入1ug LPS進行藥物刺

2、激,另外兩個培養(yǎng)皿作為空白對照,藥物刺激8小時后,分別收集每個培養(yǎng)皿細胞,之后分別提取每個培養(yǎng)皿中細胞表達的RNA。
　　 第二階段:將提取到的RNA做芯片分析,得到每種細胞的microRNA的表達譜,并對比同種細胞LPS刺激與未刺激的microRNA的變化,找出刺激組與正常組表達有明顯差異的microRNA。
　　 結果：
　　 1.芯片結果顯示,Jurkat細胞株中LPS干預組與未干預組細胞株相比,未見表達有

3、明顯差異的microRNA。
　　 2.芯片結果顯示,CCRF-CEM細胞株中LPS干預組與未干預組相比,microRNA-7-1的表達下調明顯,Log2(G2/G1)值為-0.41(p<0.05)；
　　 結論：
　　 通過LPS刺激體外培養(yǎng)CCRF-CEM和Jurkat細胞,初步篩選出可能參與調節(jié)淋巴細胞炎癥免疫應答的microRNA。如:miR-7-1。
　　 miR-7-1的在LPS刺激CCRF-