他汀類藥物對(duì)缺血性腦血管病患者體液免疫指標(biāo)的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、研究背景及目的：
　　他汀類藥物，即3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，它作用于內(nèi)源性膽固醇生物合成的限速酶——HMG-CoA還原酶，從而抑制膽固醇合成中間產(chǎn)物甲羥戊酸的合成，通過該途徑抑制內(nèi)源性膽固醇的生物合成，他汀類藥物因其調(diào)節(jié)血脂、降低內(nèi)源性膽固醇作用而被廣泛應(yīng)用于血脂調(diào)節(jié)及臨床動(dòng)脈硬化性疾病的預(yù)防和治療。除了血脂調(diào)節(jié)功能以外，目前，他汀類藥物的免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用正逐漸受到關(guān)注。他汀類藥物的免疫

2、調(diào)節(jié)功能主要通過抑制甲羥戊酸(mevanolate，MAV)的生物合成，減少下游焦磷酸法尼酯(farnesylpyrophosphateFPP)和櫳牛兒基櫳牛兒基焦磷酸(geranyl geranyl pyrophos phate，GGPP)的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制小GTP結(jié)合蛋白的活化而實(shí)現(xiàn)的:FPP和GGPP是內(nèi)源性膽固醇生物合成的兩個(gè)中間產(chǎn)物，在特異性酶的催化下，能與Ras、Rho家族等小G蛋白共價(jià)結(jié)合發(fā)生異戊二烯化，發(fā)生異戊二烯化的小G

3、蛋白活化并參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，傳遞細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)從而引起下游多種效應(yīng)。他汀類藥物作用于HMG-CoA還原酶，減少了中間產(chǎn)物的形成，使得細(xì)胞信號(hào)分子活化受阻導(dǎo)致下游多種成分的改變進(jìn)而調(diào)節(jié)免疫活動(dòng)。該藥物作用可影響免疫系統(tǒng)中的一系列成分，干擾細(xì)胞免疫及體液免疫的多個(gè)環(huán)節(jié)，目前已知他汀類藥物能對(duì)Th1/Th2細(xì)胞因子分泌、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞等多種免疫成分產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，并影響細(xì)胞凋亡和增殖、抗原提呈、淋巴細(xì)胞歸巢

4、等免疫環(huán)節(jié)，他汀類藥物的免疫調(diào)節(jié)作用已用于實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物模型及臨床多種疾病的治療。目前，他汀類藥物對(duì)B細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用尚不明確，本研究的目的在于通過檢測(cè)缺血性腦血管病患者服用他汀類藥物前后外周血中與體液免疫相關(guān)的指標(biāo)變化，探討他汀類藥物在缺血性腦血管疾病患者中對(duì)B細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)作用。在體液免疫中，記憶B細(xì)胞是二次免疫中的主要效應(yīng)細(xì)胞，在接受二次抗原刺激后，它能迅速分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生大量抗體，IgG是再次免疫中生成的主要抗體類型，在二次免疫中發(fā)揮

5、重要作用。IL-21近幾年來因其在B細(xì)胞生成和活化中發(fā)揮重要作用而受到關(guān)注，IL-21可誘導(dǎo)所有B細(xì)胞亞群分化為Ig分泌細(xì)胞，分泌大量IgM、IgG和IgA，同時(shí)已有研究證實(shí)IL-21可輔助B細(xì)胞活化并產(chǎn)生抗體，同時(shí)可介導(dǎo)抗體亞型轉(zhuǎn)換，BAFF是新的腫瘤壞死因子家族成員，它能刺激B細(xì)胞生長(zhǎng)及活化。這些免疫分子與體液免疫息息相關(guān)，同時(shí)它們之間又存在相互作用和聯(lián)系，構(gòu)成免疫網(wǎng)絡(luò)，對(duì)這些分子的相關(guān)研究也相對(duì)匱乏，因此，我們選擇記憶B細(xì)胞（CD

6、19+CD27+細(xì)胞）、IL-21、BAFF及IgG作為檢測(cè)指標(biāo)，探討他汀類藥物對(duì)B細(xì)胞免疫的體內(nèi)調(diào)節(jié)作用。
　　缺血性腦血管病是神經(jīng)內(nèi)科常見多發(fā)疾病，包括TIA、腦梗死、以及高脂血癥、腦血管狹窄等引起的腦動(dòng)脈供血不足，也是臨床服用他汀類藥物最主要的患者群。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)他汀類藥物對(duì)SLE、MS患者的免疫系統(tǒng)及EAE、EAN和EAMG等免疫動(dòng)物模型均存在免疫調(diào)節(jié)作用，但這些研究大多是在免疫激活狀態(tài)下探究他汀類藥物的免疫調(diào)節(jié)作用。而臨

7、床大多數(shù)服用他汀類藥物的患者并未處于免疫激活狀態(tài)，另一方面，目前臨床使用他汀類藥物主要關(guān)注它的血脂調(diào)節(jié)以及抗動(dòng)脈硬化作用，對(duì)于他汀類藥物的免疫調(diào)節(jié)作用對(duì)于普通患者的免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生什么樣的影響尚不清楚，因此，我們選擇缺血性腦血管病患者這一臨床他汀類藥物的主要使用群體作為研究對(duì)象，探究他汀類藥物在相對(duì)非激活免疫狀態(tài)下的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　研究對(duì)象：
　　山東省千佛山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2013年6月-12月缺血性腦血管病患者。根據(jù)嚴(yán)格的

8、入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選。
　　研究方法：
　　(1)患者血液標(biāo)本的采集:于早上8:00-10:00局部皮膚消毒后采集患者空腹肘靜脈血2-3ml，加入無菌EDTA抗凝采血管，標(biāo)本在采集后24h內(nèi)上機(jī)流式檢測(cè)memoryB細(xì)胞（CD19+CD27+細(xì)胞），CD19+CD27-細(xì)胞，CD19+細(xì)胞;
　　(2)另同法取肘靜脈血5ml，加入無菌促凝采血管，離心分離血清后于-30℃凍存?zhèn)溆?，用于ELISA檢測(cè)IL-21，BA

9、FF，免疫比濁法檢測(cè)血清總IgG;
　　(3)給予患者他汀類藥物口服，分別為瑞舒伐他?。啥ǎ?0mg(n=13)，阿托伐他?。⑵胀祝?0mg(n=3)，阿托伐他?。ò罚?0mg(n=1)，每日一次，晚飯后服用，服藥治療時(shí)間為20～34天。
　　(4)口服他汀類藥物三周后再次采集患者外周肘靜脈血液標(biāo)本，EDTA抗凝血標(biāo)本用于流式細(xì)胞檢測(cè)memoryB細(xì)胞（CD19+CD27+細(xì)胞），CD19+CD27-細(xì)胞，CD19+細(xì)

10、胞。促凝血3000r/min離心10min，分離血清放置于-30℃保存，待所有標(biāo)本留齊后進(jìn)行成批檢測(cè)，用于ELISA檢測(cè)IL-21，BAFF，免疫比濁法檢測(cè)血清總IgG。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:數(shù)據(jù)分析采用SPSS11.9統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，計(jì)量資料比較使用配對(duì)t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)結(jié)果使用GRAPHPADPRISMv5軟件作圖。
　　研究結(jié)果：
　　1.缺血性腦血管病患者服用他汀類藥物后流式檢測(cè)外周血中記憶B