蛋白質高靈敏檢測分子熒光探針研究.pdf

1、蛋白質是生命內最重要的生物大分子，是生命活動的物質基礎，是生物體內一切組織的基礎物質。并在生命現(xiàn)象和生命過程中起著決定性的作用，它與營養(yǎng)、酶、病毒、免疫、物質運輸、遺傳、生命等都有密切關系。對蛋白質進行定量分析和特異識別探討生命機理是十分重要的，其濃度和結構的研究在醫(yī)學及免疫等方面有著極其重要的意義，對生命奧秘的揭示、臨床診斷以及藥物篩選等領域的發(fā)展具有重要的意義。 在眾多的痕量蛋白的檢測方法中，熒光分析法因其具有靈敏度高、選擇

2、性好、動態(tài)響應范圍寬以及測定條件更接近生命體的生理環(huán)境的優(yōu)點而在蛋白質分析中應用廣泛。熒光探針技術是利用物質的光物理和光化學特性，在分子量級上研究溶液中蛋白質高靈敏度的分析方法，因而近年來，隨著技術的不斷進步，熒光探針法作為一種檢測新型的蛋白定量檢測方法．以其干擾少、快速、靈敏度高、準確、實用性而備受關注． 本文嘗試用熒光染料試劑燦爛甲酚藍(Brilliant Bresol Blue，BCB)和吖啶橙(Acridine Oran

3、ge,AO)作為熒光探針，通過熒光探針法對Fau蛋白的定量檢測進行了一系列的探索，通過系統(tǒng)研究兩種檢測體系的反應條件，獲得確定的研究成果，主要內容如下： l、分別以燦爛甲酚藍(brilliant cresol blue，BCB)和吖啶橙(Acridine Orange，AO)做為熒光探針，以人血清蛋白(HSA)作為蛋白質模型分子，以Tris-HCI作為緩沖溶液作為介質，討論了不同實驗條件，如溶液PH值，染料試劑的用量，試劑加入順

4、序，反應時間，反應溫度，溶液離子強度對熒光強度的影響，以此優(yōu)化了實驗條件。 2、通過實驗發(fā)現(xiàn)，在近似中性的范圍內，燦爛甲酚藍(BCB)和人血清蛋白(HSA)結合，可使BCB溶液的熒光強度加強，且熒光強度的加強程度與蛋白質的濃度具有較好的線性關系。其線性范圍為1×10.5-5mg/ml-2×10-2mg/ml，相關系數(shù)為0.9932，檢測限為9.93ng/ml，相對標準偏差(n=6)為3.09％，實驗表明該方法使用簡單方便，具有較

5、高的靈敏度． 3、通過實驗對A0.SDS—HSA三元熒光體系的研究發(fā)現(xiàn)，在一定的條件下，蛋白質的加入可使AO-SDS形成的聚合體解散，從而使體系的熒光強度加強，且熒光強度的加強程度與蛋白質的加入量成正比。其線性范圍為2×10-6mg/ml-2×10-2mg/ml，相關系數(shù)為0.9984，檢測限為1.82ng/ml，相對標準偏差為1.61％，該方法相比于前一種方法具有更高的靈敏度且具有較強的抗干擾能力。 4、論文還使用了上邊兩種探