巰基蛋白質(zhì)熒光分子探針的制備與應(yīng)用.pdf

1、巰基蛋白質(zhì)是動(dòng)物組織和體液中重要的組成部分，對(duì)它的濃度檢測(cè)有重要的意義。傳統(tǒng)的檢測(cè)巰基蛋白質(zhì)的方法有碘量法、硝普鹽法、分光光度法、電流分析法以及比色法等，但這些方法存在檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，操作繁瑣，靈敏度低等缺點(diǎn)，使巰基蛋白質(zhì)的研究與檢測(cè)受到了很大的限制。卟啉具有良好的光學(xué)性質(zhì)，高的熒光效率，相對(duì)長(zhǎng)的熒光激發(fā)（400 nm左右)和發(fā)射(660 nm左右)波長(zhǎng)等特點(diǎn)，在近紅外熒光（大于600 nm)光區(qū)，生物樣品的熒光強(qiáng)度很小，可降低背景熒光干

2、擾。馬來(lái)酰亞胺基具有能夠與巰基特異性結(jié)合的特點(diǎn)。本課題利用卟啉與馬來(lái)酰亞胺基的這些特點(diǎn)設(shè)計(jì)合成了以卟啉為熒光基團(tuán)，馬來(lái)酰亞胺基為識(shí)別基團(tuán)的四種馬來(lái)酰亞胺基苯基卟啉熒光分子探針，采用該探針對(duì)含有巰基的牛血清白蛋白（BSA）進(jìn)行定量檢測(cè)。
　　采用Adler法，以對(duì)硝基苯甲醛、吡咯、對(duì)甲基苯甲醛、對(duì)甲氧基苯甲醛、對(duì)羥基苯甲醛、對(duì)羧基苯甲醛、乙酸酐、順丁烯二酸酐為原料，合成了四種馬來(lái)酰亞胺基苯基卟啉化合物：5-(4-馬來(lái)酰亞胺基苯基)-

3、10,15,20-三(4-甲基苯基)卟啉P1、5-(4-馬來(lái)酰亞胺基苯基)-10,15,20-三(4-甲氧基苯基)卟啉P2、5-(4-馬來(lái)酰亞胺基苯基)-10,15,20-三(4-羥基苯基)卟啉P3、5-(4-馬來(lái)酰亞胺基苯基)-10,15,20-三(4-羧基苯基)卟啉P4。
　　采用紅外光譜、紫外-可見(jiàn)吸收光譜、核磁共振氫譜、元素分析等手段對(duì)目標(biāo)化合物 P1、P2、P3、P4的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。分別考察了熒光分子探針 P1、P2、

4、P3、P4對(duì)BSA的定量檢測(cè)效果，探究了以上四種熒光分子探針對(duì)BSA定量檢測(cè)的最佳實(shí)驗(yàn)條件以及干擾物質(zhì)對(duì)該檢測(cè)的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，合成的四種化合物與目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)一致。熒光分子探針 P1、P2、P3對(duì)BSA的檢測(cè)線性范圍均為0~2.0×10-8 mol/L，探針P4對(duì)BSA的檢測(cè)線性范圍為0~1.0×10-8 mol/L，線性方程、相關(guān)系數(shù)R值以及檢出限分別為：探針P1：線性方程F=72.404+6.95[BSA](10

5、-8 mol/L)，相關(guān)系數(shù)R=0.9876，檢出限為1.06 nmol/L；探針P2：線性方程F=26.367+12.861[BSA](10-8 mol/L)，相關(guān)系數(shù)R=0.9927，檢出限為0.42 nmol/L；探針P3：線性方程F=32.734+15.178[BSA](10-8 mol/L)，相關(guān)系數(shù)R=0.9931，檢出限為0.39 nmol/L，探針P4：線性方程F=66.434+35.024[BSA](10-8 mol/