檸檬酸裂酶的乙?；{(diào)控及其在肺癌中的作用和分子機制.pdf

1、蛋白質(zhì)乙?；且环N重要的蛋白翻譯后修飾，由于其在生命活動中的重要作用受到日益關(guān)注。我們和其他的實驗室用質(zhì)譜鑒定的方法，發(fā)現(xiàn)了很多核外蛋白質(zhì)存在乙?；揎?。值得一提的是，幾乎所有的細胞代謝循環(huán)中的代謝酶，均存在不同程度的乙?；{(diào)控。此外研究表明腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細胞代謝的異常密不可分。我們的研究工作旨在通過對腫瘤代謝途徑中關(guān)鍵酶的研究，闡述代謝酶的乙?；揎椩谀[瘤生長增殖調(diào)控中的作用，從而為腫瘤學的研究提供理論支持，為以后的臨床腫瘤治療提供

2、新的理論基礎(chǔ)。
　　為了進一步闡明蛋白質(zhì)的乙酰化修飾與腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，我們選取了細胞脂肪酸合成代謝中的重要代謝酶檸檬酸裂酶(ACLY)作為研究對象，深入研究乙?；揎棇Φ鞍追€(wěn)定性調(diào)控及其在腫瘤細胞代謝的重要作用。通過大量系統(tǒng)性的實驗，我們發(fā)現(xiàn)以下幾點重要內(nèi)容:
　　一、細胞內(nèi)能量水平調(diào)節(jié)ACLY的乙酰化和泛素化。我們發(fā)現(xiàn)高糖促進ACLY的乙?；?，進而保護其不受蛋白酶體降解，導(dǎo)致ACLY的穩(wěn)定性增加。其次，ACLY的

3、乙?；揎椷€可以提高其自身的酶催化活力，從而更進一步的促進其行使細胞學功能。
　　二、ACLY三個重要的乙酰化調(diào)控位點為K540，K546和K554。突變上述三個乙?；稽c后我們發(fā)現(xiàn)ACLY的泛素化水平有顯著降低。通過免疫學方法，我們成功制備了識別這三個位點乙?；降腁CLY內(nèi)源抗體，并用實驗證明明細胞的能量狀態(tài)，特別是細胞內(nèi)葡萄糖水平，可以顯著促進ACLY的K540，K546和K554乙?；剑瑥亩{(diào)控其蛋白的穩(wěn)定性。

4、>　　三、PCAF和SIRT2分別是ACLY的乙酰化酶和去乙?；浮?，高葡萄糖增強PCAF與ACLY的相互作用，導(dǎo)致ACLY的乙?；Ｗo其不受降解，增加其蛋白的穩(wěn)定性;SIRT2是ACLY的去乙?；福诘推咸烟乔闆r下，降低ACLY的乙?；剑瑥亩龠M其泛素化降解。
　　四、我們以人非小細胞肺癌模式細胞A549為研究材料，成功構(gòu)建了表達水平與內(nèi)源相當?shù)腁CLY的乙?；蛔凅w(3KQ，3KR)穩(wěn)定細胞株。通過對細胞生長計數(shù)、外源

5、脂類的吸收以及裸鼠成瘤實驗表明，ACLY的乙?；ㄟ^增加脂肪酸的合成來促進腫瘤細胞和腫瘤移植物的生長。
　　五、ACLY乙?；揎椗c肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在對比55對癌與癌旁的臨床肺癌樣品后我們發(fā)現(xiàn)，有大約50％的樣品存在ACLY蛋白水平上調(diào)，而這其中又有大于50％的樣品中檢測到了上調(diào)的ACLY乙酰化水平，從而證明了ACLY的乙酰化修飾在肺癌發(fā)生發(fā)展中的重要性。
　　本論文所報道的新發(fā)現(xiàn)在于:首次報道了ACLY的乙?；头?/p>