檸檬酸裂酶的乙酰化調(diào)控及其在肺癌中的作用和分子機(jī)制.pdf

1、蛋白質(zhì)乙?；且环N重要的蛋白翻譯后修飾，由于其在生命活動(dòng)中的重要作用受到日益關(guān)注。我們和其他的實(shí)驗(yàn)室用質(zhì)譜鑒定的方法，發(fā)現(xiàn)了很多核外蛋白質(zhì)存在乙?；揎?。值得一提的是，幾乎所有的細(xì)胞代謝循環(huán)中的代謝酶，均存在不同程度的乙?；{(diào)控。此外研究表明腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞代謝的異常密不可分。我們的研究工作旨在通過對(duì)腫瘤代謝途徑中關(guān)鍵酶的研究，闡述代謝酶的乙?；揎椩谀[瘤生長(zhǎng)增殖調(diào)控中的作用，從而為腫瘤學(xué)的研究提供理論支持，為以后的臨床腫瘤治療提供

2、新的理論基礎(chǔ)。
　　為了進(jìn)一步闡明蛋白質(zhì)的乙?；揎椗c腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，我們選取了細(xì)胞脂肪酸合成代謝中的重要代謝酶檸檬酸裂酶(ACLY)作為研究對(duì)象，深入研究乙酰化修飾對(duì)蛋白穩(wěn)定性調(diào)控及其在腫瘤細(xì)胞代謝的重要作用。通過大量系統(tǒng)性的實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)以下幾點(diǎn)重要內(nèi)容:
　　一、細(xì)胞內(nèi)能量水平調(diào)節(jié)ACLY的乙?；头核鼗?。我們發(fā)現(xiàn)高糖促進(jìn)ACLY的乙酰化，進(jìn)而保護(hù)其不受蛋白酶體降解，導(dǎo)致ACLY的穩(wěn)定性增加。其次，ACLY的

3、乙?；揎椷€可以提高其自身的酶催化活力，從而更進(jìn)一步的促進(jìn)其行使細(xì)胞學(xué)功能。
　　二、ACLY三個(gè)重要的乙?；{(diào)控位點(diǎn)為K540，K546和K554。突變上述三個(gè)乙?；稽c(diǎn)后我們發(fā)現(xiàn)ACLY的泛素化水平有顯著降低。通過免疫學(xué)方法，我們成功制備了識(shí)別這三個(gè)位點(diǎn)乙酰化水平的ACLY內(nèi)源抗體，并用實(shí)驗(yàn)證明明細(xì)胞的能量狀態(tài)，特別是細(xì)胞內(nèi)葡萄糖水平，可以顯著促進(jìn)ACLY的K540，K546和K554乙?；?，從而調(diào)控其蛋白的穩(wěn)定性。

4、>　　三、PCAF和SIRT2分別是ACLY的乙?；负腿ヒ阴；浮?，高葡萄糖增強(qiáng)PCAF與ACLY的相互作用，導(dǎo)致ACLY的乙酰化，保護(hù)其不受降解，增加其蛋白的穩(wěn)定性;SIRT2是ACLY的去乙酰化酶，在低葡萄糖情況下，降低ACLY的乙?；?，從而促進(jìn)其泛素化降解。
　　四、我們以人非小細(xì)胞肺癌模式細(xì)胞A549為研究材料，成功構(gòu)建了表達(dá)水平與內(nèi)源相當(dāng)?shù)腁CLY的乙?；蛔凅w(3KQ，3KR)穩(wěn)定細(xì)胞株。通過對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)、外源

5、脂類的吸收以及裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)表明，ACLY的乙?；ㄟ^增加脂肪酸的合成來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞和腫瘤移植物的生長(zhǎng)。
　　五、ACLY乙酰化修飾與肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在對(duì)比55對(duì)癌與癌旁的臨床肺癌樣品后我們發(fā)現(xiàn)，有大約50％的樣品存在ACLY蛋白水平上調(diào)，而這其中又有大于50％的樣品中檢測(cè)到了上調(diào)的ACLY乙?；?，從而證明了ACLY的乙?；揎椩诜伟┌l(fā)生發(fā)展中的重要性。
　　本論文所報(bào)道的新發(fā)現(xiàn)在于:首次報(bào)道了ACLY的乙?；头?/p>