C8orf84在膀胱癌細(xì)胞中的功能研究.pdf

1、目的：
　　明確C8orf84在膀胱癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能；確定C8orf84是否是膀胱癌新的候選抑癌基因。
　　材料與方法：
　　構(gòu)建重組慢病毒表達(dá)細(xì)胞模型，采用PCR和Westernblot分別檢測(cè)C8orf84在重組慢病毒表達(dá)細(xì)胞模型中的mRNA和蛋白表達(dá)水平；CCK-8法和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖；Transwell小室法進(jìn)行細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)；AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡以及PI染色法檢測(cè)細(xì)

2、胞周期。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，所有定量實(shí)驗(yàn)至少獨(dú)立重復(fù)2-3次，圖中的數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±S.D.）。轉(zhuǎn)染不同病毒的細(xì)胞株之間的表達(dá)差異、細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移和侵襲、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期的差異采用Independentsamplet-test檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.001為差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　熒光效率檢測(cè)結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染了

3、C8orf84過(guò)表達(dá)慢病毒及陰性對(duì)照病毒的膀胱癌細(xì)胞株，達(dá)最高轉(zhuǎn)染效率時(shí)間為轉(zhuǎn)染病毒后第4天左右；維持最高轉(zhuǎn)染效率時(shí)間為3天左右；轉(zhuǎn)染效率大于80％。PCR及Westernblot結(jié)果顯示：5637和T24的C8orf84過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的表達(dá)水平高于空載體組細(xì)胞。細(xì)胞增殖結(jié)果顯示：5637和T24的C8orf84過(guò)表達(dá)組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線均明顯低于空載體組。5637的C8orf84過(guò)表達(dá)組細(xì)胞克隆數(shù)為91，空載體組為347，克隆形成率分別為1.

4、82%、6.94%（P<0.001）。T24的C8orf84過(guò)表達(dá)組細(xì)胞克隆數(shù)為35，空載體組為138，克隆形成率分別為0.7%、2.76%（P<0.001）。得出結(jié)論，C8orf84抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖。細(xì)胞遷移結(jié)果顯示：C8orf84過(guò)表達(dá)組細(xì)胞遷移進(jìn)入下室的細(xì)胞數(shù)量明顯少于空載體組細(xì)胞。醋酸洗脫遷移細(xì)胞測(cè)吸光值統(tǒng)計(jì)其平均吸光值分別為5637細(xì)胞組：0.0926（C8orf84過(guò)表達(dá)組）、0.1418（空載體組）（P<0.001）；

5、T24細(xì)胞組：0.0760（C8orf84過(guò)表達(dá)組）、0.1145（空載體組）（P<0.001）。得出結(jié)論，C8orf84抑制膀胱癌細(xì)胞的遷移。細(xì)胞侵襲結(jié)果顯示：C8orf84過(guò)表達(dá)組細(xì)胞遷移進(jìn)入下室的細(xì)胞數(shù)量明顯少于空載體組細(xì)胞。醋酸洗脫遷移細(xì)胞測(cè)吸光值統(tǒng)計(jì)其平均吸光值分別為5637細(xì)胞組：0.0726（C8orf84過(guò)表達(dá)組）、0.8885（空載體組）（P<0.001）；T24細(xì)胞組：0.0917（C8orf84過(guò)表達(dá)組）、0.09

6、80（空載體組）（P<0.001）。得出結(jié)論，C8orf84抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲。細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示：早期凋亡細(xì)胞所占比例分別為5637細(xì)胞組：26.7%（C8orf84過(guò)表達(dá)組）、6.15%（空載體組）（P<0.001）；T24細(xì)胞組：17.5%（C8orf84過(guò)表達(dá)組）、5.85%（空載體組）（P<0.001）。得出結(jié)論，C8orf84促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)論：
　　C8orf84抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖；C8orf8