抗上皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子對(duì)膀胱癌細(xì)胞中c-jun與HB-EGF的影響.pdf

1、目的：
　　 抗上皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子(Antiproliferative Factor,APF)是一種由9個(gè)氨基酸與半乳糖相連的小分子量、熱穩(wěn)定的唾液酸糖多肽,它含有Frizzled 8的跨膜片段,主要存在于間質(zhì)性膀胱炎患者的尿液中,具有強(qiáng)烈的抗膀胱上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,同時(shí)發(fā)現(xiàn)其具有抗膀胱腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,尤其對(duì)T-24細(xì)胞(膀胱癌細(xì)胞)。AP-1在腫瘤形成及發(fā)展過程中,通過促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制分化、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移等過

2、程發(fā)揮作用。APF作用于正常膀胱上皮細(xì)胞后,其c-jun的水平明顯下降,從而導(dǎo)致活性蛋白-1(Activator Protein-1,AP1)的整體水平下降,其活性降低,AP-1調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá),包括細(xì)胞增殖、分化、炎癥、宿主反應(yīng)和惡變,而AP-1的活性降低則影響了抑癌基因P53及細(xì)胞周期調(diào)控基因P21(P21WAF1/CIP1)基因蛋白的表達(dá),從而使細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖受到抑制,細(xì)胞則出現(xiàn)凋亡或死亡。HB-EGF在多種組織和細(xì)胞中表達(dá),如血

3、管內(nèi)皮細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、膀胱上皮細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等,對(duì)多種細(xì)胞具有促分裂增殖的作用。HB-EGF對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的促其增生的作用,而APF具有強(qiáng)烈抑制HB-EGF功能和分泌的作用,從而抑制膀胱腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及增生。通過四唑鹽比色法(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di.phenytetrazoliumromide,MTT)檢測(cè)APF對(duì)膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖影響；通過Western bl

4、ot方法檢測(cè)不同濃度的有活性APF和無活性APF對(duì)膀胱癌細(xì)胞中c-jun與HB-EGF的影響,從而進(jìn)一步探討APF對(duì)膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖的影響。
　　 方法：
　　 培養(yǎng)膀胱癌細(xì)胞T-24細(xì)胞系,將有活性APF及無活性APF取不同濃度分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,作用于膀胱癌T-24細(xì)胞。通過MTT用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀0D490nm處測(cè)量各組的吸光值來檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞增殖率；通過Western blot方法得到c-jun與HB-EGF的

5、電泳圖像,根據(jù)電泳圖象所得條帶的寬度和亮度進(jìn)行半定量分析來檢測(cè) APF對(duì)膀胱癌T-24細(xì)胞中c-jun與HB-EGF蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 MTT得出結(jié)果用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD490nm處測(cè)量各孔的吸光值,顯示隨著有活性APF濃度的增加,OD490nm處吸光值明顯減低,其吸光值減低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而加入無活性.APF吸光值無明顯變化,與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。根據(jù)電泳圖象所得

6、條帶的寬度和亮度進(jìn)行半定量分析,顯示隨著有活性APF濃度增加,c-jun與HB-EGF表達(dá)逐漸減少,不同有活性APF濃度組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),無活性.APF組與有活性APF0μg組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 APF可能影響AP-1中的c-jun的表達(dá),c-jun 直接作用于細(xì)胞橋接使細(xì)胞生長(zhǎng)停滯,APF作用細(xì)胞后,其c-jun的水平明顯下降,從而導(dǎo)致.AP-1的整體水平下降,