miR-137在膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)及調(diào)控其增殖和侵襲的研究.pdf

1、全世界膀胱癌的發(fā)病率位于全身惡性腫瘤的第五位，在泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中排在第二位。大約90％的膀胱癌患者的病理分型屬于尿路上皮癌，其一般分為非肌層侵潤性和肌層侵潤性兩種。大約80%左右的膀胱癌患者初期被診斷為非浸潤性尿路上皮癌，雖然在后期積極的接受了膀胱內(nèi)鏡手術(shù)和膀胱灌注治療，但在5年內(nèi)復(fù)發(fā)的患者比例仍然占到50%-70%；并且有10%-30%的患者進(jìn)一步發(fā)展成為肌層侵潤性尿路上皮癌。浸潤性尿路上皮癌具有較強(qiáng)的侵襲能力，患者的預(yù)后較差，5年

2、生存率低，因此探索膀胱癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，尋找可靠的生物標(biāo)志物和有效的治療靶點(diǎn)對提高膀胱癌患者的生存率顯得尤為重要。
　　微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一種廣泛表達(dá)的、大小為18-24nt的內(nèi)源性非編碼RNA，與靶基因的3UTR特異性地結(jié)合從而抑制靶基因表達(dá)，在調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、增殖及凋亡中起重要作用。很多研究表明，miRNAs與多種腫瘤進(jìn)展的有關(guān)，例如：胃癌、淋巴瘤、肝癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌等等。miR-137是一

3、個(gè)短鏈非編碼的RNA分子，其主基因位于人染色體Lp22。有研究表明miR-137在膀胱癌中表達(dá)失調(diào)，但miR-137在膀胱癌中的作用還不清楚，尤其是如何影響膀胱癌的增殖和遷移還未見報(bào)道。因此，本文以miR-137為研究對象，分析了其在正常膀胱細(xì)胞和膀胱癌細(xì)胞系中，以及膀胱癌組織和鄰近正常粘膜組織中的表達(dá)；通過生物信息學(xué)和熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)鑒定其靶基因，并進(jìn)一步分析了miR-137及其靶基因?qū)Π螂装┘?xì)胞增殖、侵襲和遷移等生物學(xué)行為的影響，為

4、闡明miR-137在膀胱癌發(fā)生中的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
　　本論文使用高通量、高靈敏度和高特異性Agilent公司的miRNA芯片，所得的數(shù)據(jù)通過Agilent Feature Extraction10.5和genespring分析研究了膀胱癌組織與癌旁正常膀胱組織的miRNA表達(dá)譜，從中選擇在膀胱癌組織中表達(dá)上調(diào)的miR-137作為研究對象。同時(shí)，從生物信息學(xué)的角度，對miR-137的結(jié)構(gòu)，表達(dá)特征進(jìn)行了分析，并從表觀遺傳修飾甲

5、基化的角度分析得出miR-137的表達(dá)與甲基化有一定的關(guān)系。進(jìn)一步分析了miR-137在正常膀胱細(xì)胞系和膀胱癌細(xì)胞系，以及膀胱癌組織和鄰近正常粘膜組織中的表達(dá)。實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果表明，與正常的膀胱細(xì)胞系SVHUC-1相比，miR-137在膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)顯著上調(diào)；并且在所檢測的50例臨床病人的膀胱癌樣本中，miR-137在腫瘤組織中的表達(dá)水平遠(yuǎn)高于鄰近的正常粘膜組織，其中miR-137表達(dá)上調(diào)45例(45/50,90%)，表達(dá)下調(diào)

6、為5例(5/50,10%)。并將臨床獲取的50例膀胱癌組織按照pTNM和pM分組進(jìn)一步進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-137的表達(dá)隨著膀胱癌的惡化、分期的進(jìn)展而增高。分析了miR-137對膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響。通過CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在膀胱癌細(xì)胞中過表達(dá)miR-137后促進(jìn)了其增殖，而加入miR-137抑制劑后抑制了膀胱癌細(xì)胞的增殖。Transwell的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR-137高表達(dá)促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的侵襲和遷移，低表

7、達(dá)抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲和遷移。
　　通過生物信息學(xué)的方法預(yù)測并篩選了miR-137的靶基因，結(jié)果顯示miR-137與膜蛋白受體基因PAQR3的3'UTR互補(bǔ)。定量RT-PCR的結(jié)果顯示，在膀胱癌細(xì)胞T24中過表達(dá)miR-137后，PAQR3的表達(dá)降低；Western blot和熒光素酶的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，PAQR3是miR-137的一個(gè)靶基因。在T24細(xì)胞中轉(zhuǎn)染PAQR3的siRNA后，PAQR3的蛋白表達(dá)顯著降低；細(xì)胞增殖的實(shí)

8、驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾PAQR3后，膀胱癌細(xì)胞T24的細(xì)胞增殖能力顯著提高，這與miR-137過表達(dá)在膀胱癌細(xì)胞增殖中的影響相似。同時(shí)，在T24細(xì)胞中同時(shí)轉(zhuǎn)染PAQR3過表達(dá)載體和miR-137mimics后，PAQR3表達(dá)恢復(fù)，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)表明PAQR3能拮抗miR-137對膀胱癌細(xì)胞系T24增殖和侵襲的促進(jìn)作用。
　　綜上所述，miR-137在人膀胱癌的細(xì)胞和組織中的表達(dá)是顯著上調(diào)的，過表達(dá)miR-137能夠促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的增殖，侵