人肝微粒體中CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9活性檢測及四種中藥注射劑對其影響的研究.pdf

1、目的:考察中藥注射劑曲克蘆丁腦蛋白水解物注射液、大株紅景天注射液、注射用紅花黃色素和注射用血塞通（凍干）對人肝微粒體中三種酶CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9活性的影響。
　　方法:①選擇非那西丁、雙氯芬酸和氯唑沙宗分別作為CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1的探針藥物，建立體外肝微粒體孵育體系。用HPLC法測定各個探針藥物的代謝產(chǎn)物對乙酰氨基酚、4-羥基雙氯芬酸和6-羥基氯唑沙宗的生成量的影響，計算出各自Vmax和Km

2、，考察酶活性變化。②分別將不同體積百分濃度的曲克蘆丁腦蛋白水解物注射液和大株紅景天注射液，以及不同濃度的注射用紅花黃色素和注射用血塞通（凍干）加入到人肝微粒體孵育體系中，再次測得各探針藥物的代謝產(chǎn)物生成量，求得半數(shù)抑制濃度(IC50)。
　　結果:①非那西丁、雙氯芬酸和氯唑沙宗及其各自內(nèi)標和代謝產(chǎn)物峰型光滑對稱，分離良好。對乙酰氨基酚、6-羥基氯唑沙宗和4-羥基雙氯芬酸線性范圍分別為1.00～50.0μmol·L-1、0.50～3

3、0.0μmol·L-1和0.50～30.0μmol·L-1。日內(nèi)精密度和日間精密度都低于10％，準確度都在85％～115％內(nèi)。處理回收率都高于85％，穩(wěn)定性都低于5％。②酶動力學考察:非那西丁的酶動力學參數(shù)Km為93.0μmol·L-1，Vmax為0.99 nmol·min-1·mg protein-1;雙氯芬酸的酶動力學參數(shù)Km為18.2μmol·L-1，Vmax為1.42 nmol·min-1·mg protein-1，氯唑沙宗的酶

4、動力學參數(shù)Km為45.7μmol·L-1，Vmax為0.65 nmol·min-1·mg protein-1。③IC50:大株紅景天注射液對CYP1A2和CYP2C9有抑制作用，IC50分別為10.8％和75.5％，對CYP2E1無明顯抑制。曲克蘆丁腦蛋白水解物注射液對CYP2E1有抑制作用，IC50為33.4％，而對CYP1A2和CYP2C9無明顯抑制。注射用紅花黃色素對CYP2C9有抑制作用，IC50為574.6μg·ml-1，對C