白藜蘆醇對(duì)HepG2細(xì)胞中CYP2E1活性的調(diào)節(jié)作用及效應(yīng)研究.pdf

1、目的：觀察白藜蘆醇對(duì)乙醇誘導(dǎo)的CYP2E1酶活性變化的影響，以及白藜蘆醇對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞株(hepatoma carcinoma cell，HepG2)生長(zhǎng)的影響和誘導(dǎo)其凋亡的作用。
　　方法：利用白藜蘆醇與HepG2共同培養(yǎng)建立細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)HepG2，取生長(zhǎng)良好的3～6代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。①首先觀察白藜蘆醇對(duì)乙醇誘導(dǎo)的CYP2E1酶活性變化的影響，實(shí)驗(yàn)分組：乙醇組（終濃度分別為50，100，150

2、mmol/L）、白藜蘆醇組（終濃度分別為12.5，25，50，100，150μmol/L）和空白對(duì)照組，應(yīng)用RT-PCR、Western blot技術(shù)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)乙醇誘導(dǎo)的CYP2E1活性變化的影響。②觀察白藜蘆醇對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞株(hepatoma carcinoma cell，HepG2)生長(zhǎng)的影響和誘導(dǎo)其凋亡的作用，實(shí)驗(yàn)分組：白藜蘆醇組（終濃度分別為12.5，25，50，100，150μmol/L）和對(duì)照組（空白對(duì)照組不加

3、任何藥物，溶劑對(duì)照組加入等體積的DMSO），應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率；AO/EB雙染色法觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)；流式細(xì)胞技術(shù)檢驗(yàn)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期。
　　結(jié)果：
　　1．與空白對(duì)照組相比，乙醇能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞中CYP2E1活性增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與乙醇組相比，低濃度（12.5μmol/L）白藜蘆醇對(duì)乙醇此種作用的抑制效果不明顯，中高濃度（25～150μmol/L）白藜蘆醇能明顯的抑制這一現(xiàn)象。差異

4、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2．與溶劑對(duì)照組相比，不同濃度白藜蘆醇均能對(duì)HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)起到一定程度的抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3．與溶劑對(duì)照組相比，不同濃度白藜蘆醇均能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），并發(fā)生明顯的形態(tài)學(xué)改變，同時(shí)白藜蘆醇能影響細(xì)胞周期，使細(xì)胞停止生長(zhǎng)于G1期。
　　結(jié)論：
　　1．乙醇能明顯誘導(dǎo)肝臟腫瘤HepG2細(xì)胞內(nèi)CYP2E1酶活