六種6,7-呋喃香豆素對大鼠肝微粒體CYP2C9和2C19活性的影響.pdf

1、目的
　　 通過體外孵育反應體系,觀察六種6,7-呋喃香豆素類化合物(補骨脂素、異茴芹素、花椒毒酚、花椒毒素、歐前胡素和異歐前胡素)對大鼠肝微粒體CYP2C9、CYP2C19活性的影響,并計算半數(shù)抑制濃度IC50。在體外代謝實驗結果的基礎上,觀察給予白芷總香豆素組分(TCD)對經CYP2C9、CYP2C19代謝的藥物苯妥英鈉、普萘洛爾在大鼠體內藥動學參數(shù)的影響。
　　 方法
　　 ①采用健康的成年雄性Wistar

2、大鼠,經苯巴比妥誘導肝藥酶活性,利用CaCl2沉淀法制備大鼠肝微粒體,并測定大鼠肝微粒體總蛋白含量、CYP總量和細胞色素b5(cytochromeb5,Cytb5)。②500μL體外溫孵反應體系中,分別加入六種6,7-呋喃香豆素類化合物或陽性對照藥氯霉素,使其終濃度為1.0,2.0,4.0,8.0,16.0和32.0μmol.mL-1,同時設立空白對照組;各管加入CYP2C9或CYP2C19的探針藥甲苯磺丁脲(Tolbutamide,T

3、BM)或美芬妥因(Mephenetoin,MPT)后進行孵化反應。用高效液相色譜法分別檢測體外反應體系中兩種探針藥代謝物4-OH-TBM和4-OH-MPT的終濃度。并計算IC50,評價六種香豆素對大鼠肝微粒體CYP2C9和2C19活性的抑制程度。③取健康雄性大鼠16只,按體重隨機分成兩組。試藥組(Ⅱ)ig50.0mg·kg-1TCD,每日1次,連續(xù)3日;對照組(Ⅰ)給予等容量生理鹽水。末次灌胃1h后,各組ig苯妥英鈉50mg·kg-1,

4、于給藥后1,2,3,4,5,7,9,12,15,20和25h后剪尾取血,高效液相色譜法檢測血漿中苯妥英鈉的濃度,并計算藥動學參數(shù)。④取健康雄性大鼠16只,按體重隨機分成兩組。試藥組(Ⅱ)ig50.Omg·kg-1TCD,每日1次,連續(xù)3日;對照組(Ⅰ)ig等容量生理鹽水。末次灌胃1h后,各組ig普萘洛爾10mg·kg-1,于ig后0.33,0.66,1,1.5,2,3,4,5,7,9和11h時剪尾取血,高效液相色譜法檢測血漿中普萘洛爾的

5、濃度,并計算藥動學參數(shù)。
　　 結果
　　 ①經苯巴比妥誘導的大鼠肝微粒體蛋白含量為20.08mg·g-1Liverwet,CYP總量和Cytb5含量分別為0.51和0.35nmol·mg-1Protein。其中CYP總量比正常對照組提高了21.38％。②六個濃度的陽性對照藥氯霉素均強烈抑制了4-OH-TBM和4-OH-MPT的生成量,且呈劑量依賴性抑制(p＜0.01)。六個濃度的香豆素化合物均有不同程度的抑制作用。對C

6、YP2C9的IC50值(μamol·mL-1)分別為:補骨脂素(5.26)、歐前胡素(7.15)、花椒毒酚(21.88)異歐前胡素(31.25)、異茴芹素(40.76)、花椒毒素(52.95)和氯霉素(0.33);對CYP2C19的IC50值(μmol·mL-1)分別為:補骨脂素(5.40)、歐前胡素(9.82)、花椒毒酚(41.57)異歐前胡素(15.37)、異茴芹素(94.78)、花椒毒素(89.45)和氯霉素(0.55)。③兩組苯

7、妥英鈉主要藥動學參數(shù):對照組(Ⅰ)Ka(0.22h-1)、Ke(0.10h-1)、t1/2α(2.31h)、t1/2β(7.62h)、AUC(314.63μg·h·mL-1)、CL(0.16L·h-1)、Tmax(5.64h)和Vd(0.99L·kg-1);試藥組(Ⅱ)Ka(0.27h-1)、Ke(0.06h-1)、t1/2α(2.31h)、t1/2β(13.46h)、AUC(457.83/μg·h·mL-1)、CL(0.11L·h-1

8、)、Tmax(6.37h)和Vd(1.06L·kg-1)。合用TCD后苯妥英鈉的消除速率常數(shù)Ke明顯減小,清除率CL明顯下降,曲線下面積AUC明顯增加。④兩組普萘洛爾主要藥動學參數(shù):對照組(Ⅰ)Ka(1.95h-1)、Ke(0.16h-1)、t1/2n(0.36h)、t1/2β(4.59h)、AUC(690.70μg·h·mL-1)、CL(14.98L·h-1)、Tmax(1.41h)和Vd(95.11L·kg-1);試藥組(Ⅱ)Ka(

9、1.94h-1)、Ke(0.13h-1)、t1/2α(0.38h)、t1/2β(5.67h)、AUC(851.08μg·h·mL-1)、CL(12.43L·h-1)、Tmax(1.41h)和Vd(94.92L·kg-1)。合用TCD后苯妥英鈉的消除速率常數(shù)Ke明顯減小,清除率CL明顯下降,曲線下面積AUC明顯增加。
　　 結論
　　 ①經苯巴比妥誘導后,應用CaCl2沉淀法制備的大鼠肝微粒體CYP含量明顯提高,能充分滿足

10、體外藥物代謝研究的需要。②補骨脂素和歐前胡素對大鼠肝微粒體CYP2C9和CYP2C19的活性呈中等程度的抑制作用。其他香豆素化合物仍有較弱的抑制作用,IC50均小于100μmol·L-1。對CYP2C9抑制作用大致順序是:補骨脂素≥歐前胡素＞花椒毒酚＞異歐前胡素＞異茴芹素＞花椒毒素;對CYP2C19抑制作用大致順序是:補骨脂素＞歐前胡素＞異歐前胡素＞花椒毒酚＞花椒毒素≥異茴芹素。③TCD可明顯減慢苯妥英鈉在大鼠體內的代謝過程。④TCD可