金葡菌體外感染激活成骨細(xì)胞NF-kB信號(hào)通路及其相關(guān)研究.pdf

1、目的：驗(yàn)證金葡菌體外感染能夠粘附并內(nèi)化于成骨細(xì)胞及影響其內(nèi)化數(shù)量的因素；觀察金葡菌體外感染激活成骨細(xì)胞的NF-κB信號(hào)通路情況；觀察金葡菌體外感染所激活的成骨細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路參與調(diào)控白介素6(IL-6)和單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)的分泌情況；探討金葡菌體外感染所激活的成骨細(xì)胞NF.KB信號(hào)通路的原因。
　　 方法：透射電鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察金葡菌體外感染成骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)情況。流式細(xì)胞儀檢測(cè)金葡菌體外感染內(nèi)化于成骨

2、細(xì)胞的數(shù)量。Western免疫印跡與凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)IkBα的降解和胞核內(nèi)NF-κB的活性從而判斷成骨細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路激活情況。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)與阻斷NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方法觀察金葡菌感染所激活的NF-κB信號(hào)通路參與調(diào)控IL-6和MCP-1的分泌情況。通過(guò)不同條件下的金葡菌感染或作用成骨細(xì)胞，探討金葡菌感染所激活的成骨細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的原因。
　　 結(jié)果：金葡菌體外感染能夠粘附并內(nèi)化于成骨細(xì)胞，

3、其內(nèi)化于成骨細(xì)胞的數(shù)量在感染30 min或感染復(fù)數(shù)為250時(shí)達(dá)到峰值，5μg/ml細(xì)胞松弛素D或0.6mM單丹磺酰尸胺基本能夠阻斷成骨細(xì)胞對(duì)金葡菌的內(nèi)化。金葡菌感染誘導(dǎo)成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)IkBα發(fā)生降解和胞核內(nèi)NF-κB活性增加，從而成骨細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路激活。Z-LLL-al能夠顯著抑制金葡菌感染的成骨細(xì)胞分泌IL-6和MCP-1。金葡菌分泌的毒素因子作用的成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)的IkBα相對(duì)0 min無(wú)明顯降解，P>0.05，其胞核內(nèi)NF-

4、kB無(wú)明顯活性；金葡菌感染但其內(nèi)化被完全阻斷時(shí)的成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)IkBα的降解相對(duì)于單純感染組無(wú)明顯變化，P>0.05，其胞核內(nèi)NF-kB的活性仍然明顯；蛋白酶K處理的金葡菌作用的成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)IkBα的降解比正常金葡菌感染組減小了72.7％(30 min，P<0.05)，其胞核內(nèi)NF-kB的活性也明顯減?。蛔贤饩€滅活的金葡菌在作用15、30及45 min時(shí)成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)的IkBα相對(duì)0 min發(fā)生了降解，P<0.05，其胞核內(nèi)NF-kB