金葡菌體外感染激活成骨細胞NF-kB信號通路及其相關研究.pdf

1、目的：驗證金葡菌體外感染能夠粘附并內化于成骨細胞及影響其內化數(shù)量的因素；觀察金葡菌體外感染激活成骨細胞的NF-κB信號通路情況；觀察金葡菌體外感染所激活的成骨細胞NF-κB信號通路參與調控白介素6(IL-6)和單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)的分泌情況；探討金葡菌體外感染所激活的成骨細胞NF.KB信號通路的原因。
　　 方法：透射電鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察金葡菌體外感染成骨細胞的形態(tài)學情況。流式細胞儀檢測金葡菌體外感染內化于成骨

2、細胞的數(shù)量。Western免疫印跡與凝膠遷移滯后實驗分別檢測成骨細胞胞漿內IkBα的降解和胞核內NF-κB的活性從而判斷成骨細胞NF-κB信號通路激活情況。酶聯(lián)免疫吸附實驗與阻斷NF-κB信號轉導方法觀察金葡菌感染所激活的NF-κB信號通路參與調控IL-6和MCP-1的分泌情況。通過不同條件下的金葡菌感染或作用成骨細胞，探討金葡菌感染所激活的成骨細胞NF-κB信號通路的原因。
　　 結果：金葡菌體外感染能夠粘附并內化于成骨細胞，

3、其內化于成骨細胞的數(shù)量在感染30 min或感染復數(shù)為250時達到峰值，5μg/ml細胞松弛素D或0.6mM單丹磺酰尸胺基本能夠阻斷成骨細胞對金葡菌的內化。金葡菌感染誘導成骨細胞胞漿內IkBα發(fā)生降解和胞核內NF-κB活性增加，從而成骨細胞NF-κB信號通路激活。Z-LLL-al能夠顯著抑制金葡菌感染的成骨細胞分泌IL-6和MCP-1。金葡菌分泌的毒素因子作用的成骨細胞胞漿內的IkBα相對0 min無明顯降解，P>0.05，其胞核內NF-

4、kB無明顯活性；金葡菌感染但其內化被完全阻斷時的成骨細胞胞漿內IkBα的降解相對于單純感染組無明顯變化，P>0.05，其胞核內NF-kB的活性仍然明顯；蛋白酶K處理的金葡菌作用的成骨細胞胞漿內IkBα的降解比正常金葡菌感染組減小了72.7％(30 min，P<0.05)，其胞核內NF-kB的活性也明顯減??；紫外線滅活的金葡菌在作用15、30及45 min時成骨細胞胞漿內的IkBα相對0 min發(fā)生了降解，P<0.05，其胞核內NF-kB