抗GB1-VFT的卵黃抗體在蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用中的初步研究.pdf

1、蛋白質(zhì)組學(xué)研究是繼基因組學(xué)研究后的生命科學(xué)發(fā)展的又一個(gè)研究熱點(diǎn)。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能最終直接影響著生命活動(dòng)的變化，基因轉(zhuǎn)錄水平的研究只能在一定程度上反映基因表達(dá)產(chǎn)物的變化，而真正發(fā)揮功能的蛋白要經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯調(diào)控以及翻譯后加工等許多步驟和調(diào)控才能形成，因而對(duì)蛋白質(zhì)的直接研究才能真實(shí)的解釋各種生命現(xiàn)象。但是目前研究蛋白質(zhì)的手段和方法還沒(méi)有很大的發(fā)展，所以尋找有效、快捷的蛋白分析技術(shù)成為了一個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。蛋白芯片技術(shù)的出現(xiàn)給蛋白組學(xué)

2、研究帶來(lái)新思路。蛋白組學(xué)研究中一個(gè)主要的內(nèi)容就是要研究在不同生理狀態(tài)或病理狀態(tài)下蛋白水平的量變，微型化、集成化、高通量化的抗體芯片就是一個(gè)非常好的研究工具，它也是蛋白芯片中發(fā)展最快，在技術(shù)上已日益成熟。這些抗體芯片有的已經(jīng)在向臨床應(yīng)用上發(fā)展，比如腫瘤標(biāo)志物抗體芯片等，多數(shù)則用在科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。
　　 本研究結(jié)合實(shí)驗(yàn)室在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的優(yōu)勢(shì)和加拿大McGill University進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究合作，主要負(fù)責(zé)抗體芯片開(kāi)發(fā)

3、工作中抗體制備工作，包括質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)、純化以及抗體制備，主要制備的是針對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中通路蛋白的抗體，包括PAK1、RhoA、Rac1、MEK1、Rho-GAP、SH3(2)-NCK、SH2(2)-PLC、C-SRC等（注釋見(jiàn)附錄）。首先制備了抗GB1-VFT（γ-氨基丁酸受體B第一亞型配體結(jié)合區(qū)）的卵黃抗體IgG（簡(jiǎn)稱IgY），由于卵黃抗體芯片檢測(cè)過(guò)程中還需要用到特異性好，效價(jià)高且穩(wěn)定性強(qiáng)的二抗，因此也制備了針對(duì)IgY的Fc端的單克隆