生物質(zhì)譜技術(shù)研究及其在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用.pdf

1、本研究包括兩方面的工作:納升噴霧裝置的研制及其在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用和穩(wěn)定同位素化學(xué)標(biāo)記新方法的探討.放置金屬絲穿過(guò)玻璃噴頭中是一種提供電接觸的簡(jiǎn)單方法,為了克服使用細(xì)金屬絲難于操作的局限,我們采用相對(duì)粗的金屬絲并將玻璃噴頭制作成一端帶有很長(zhǎng)的玻璃絲以減緩分析液的噴霧流速.這一改進(jìn)的納升噴霧頭能長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定噴霧,噴霧流速80-120 nL/min.納升噴霧頭有很好的檢測(cè)靈敏度,30 min噴霧濃度為25 pg/μL利血平溶液其準(zhǔn)分子離子峰的

2、平均信噪比(S/N)為42.改進(jìn)的納升噴霧頭可用于分析標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液酶解及膠上酶解肽,消耗不足1微升樣品便可實(shí)施蛋白鑒定;還可分析實(shí)際蛋白樣品,選擇了7個(gè)由兩維凝膠電泳分離的人類(lèi)U937細(xì)胞裂解液的蛋白質(zhì)點(diǎn),其鑒定結(jié)果明顯好于相應(yīng)的LC/MS鑒定結(jié)果.同時(shí),我們探討了在納升噴霧過(guò)程中添加一輔助電極對(duì)納升噴霧的影響,發(fā)現(xiàn)輔助電極的存在可顯著改善納升噴霧的信噪比,輔助電極存在下電場(chǎng)分布的模擬計(jì)算也支持了這一結(jié)果.基于金屬絲提供電接觸的納升噴

3、霧頭最大缺陷是難于和其它設(shè)備在線連接,為了彌補(bǔ)這一不足,我們制作一種噴霧裝置.此裝置借助于不銹鋼三通將玻璃噴頭和金屬絲有效的相連接,三通的其中一個(gè)入口作為氣體通路,允許氣體輔助樣品裝載.此裝置通過(guò)石英毛細(xì)管可于其它設(shè)備在線連接.在此裝置中金屬絲無(wú)須穿過(guò)玻璃噴頭,因而允許玻璃噴頭保持極小的噴霧口徑,這一安排使納升噴霧有更低的分析液流速30-60 nL/min和更高的檢測(cè)靈敏度,25 min噴霧濃度為25 pg/μL利血平溶液其準(zhǔn)分子離子峰

4、的平均信噪比(S/N)為179.濃度為1 ng/μL的肌紅蛋白和細(xì)胞色素C溶液酶解肽可進(jìn)行蛋白鑒定,濃度為5 ng/μL的細(xì)胞色素C可提供十分滿(mǎn)意的納升噴霧的質(zhì)譜圖.我們比較了酸性、中性和堿性介質(zhì)中蛋白溶液酶解肽噴霧的差異,此外將噴霧裝置與一注射泵連接用來(lái)監(jiān)測(cè)有機(jī)化學(xué)反應(yīng)的發(fā)生.穩(wěn)定同位素化學(xué)標(biāo)記新方法的探討致力尋找簡(jiǎn)單、有效的同位素化學(xué)標(biāo)記方法.我們改進(jìn)了傳統(tǒng)的氨基酸/肽季銨化方法,用碳酸銀替代碳酸氫鉀催化季銨化反應(yīng)的發(fā)生.改進(jìn)的季銨