大蒜辣素與血液中蛋白相互作用及在大鼠的腸吸收特性研究.pdf

1、目的：從鮮蒜中提取大蒜辣素并進行分離純化，與采用蒜氨酸與蒜酶合成大蒜辣素的方法進行比較，并對歐盟藥典(EP8.0)中收載的大蒜辣素含量測定方法進行方法學驗證；測定大蒜辣素與大鼠及人的血漿蛋白結(jié)合率;研究大蒜辣素在大鼠血液中的分布及與血液中蛋白相互作用；研究大蒜辣素在在大鼠不同腸段吸收特性。
　　方法：
　　1.取2kg鮮蒜去皮勻漿后，加入95％乙醇沉淀蛋白后，經(jīng)過一系列濃縮提取分離純化后得到較高濃度的大蒜辣素，采用歐盟藥典中

2、色譜方法，測定大蒜辣素注射液中大蒜辣素的含量并進行完整的方法學驗證。
　　2.以羥苯乙酯為替代對照品、甲醇和1%甲酸水溶液梯度洗脫，建立生物樣品中大蒜辣素含量測定方法，采用超濾法測定大蒜辣素與大鼠及人的血漿蛋白結(jié)合率。
　　3.采用熒光光譜法及同步熒光光譜法，以280nm為激發(fā)波長，掃描大蒜辣素與牛血紅蛋白(Bovine Hemoglobin，BHB)、牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin，BSA)及人血清

3、白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)作用后的熒光光譜圖，并分別設定波長差Δλ=15及60nm掃描同步熒光光譜圖，計算作用參數(shù)。
　　4.采用尤斯室裝置測定大蒜辣素在大鼠十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸的吸收特性。
　　結(jié)果：
　　1.從鮮蒜中提取的大蒜辣素濃度最高可達8.27mg·mL-1；歐盟藥典中測定大蒜辣素含量方法經(jīng)方法學驗證結(jié)果良好。
　　2.在本實驗色譜條件下測得1 mg羥苯乙酯相當于10

4、.8mg大蒜辣素，低、中、高三個濃度大蒜辣素溶液與大鼠和人血漿蛋白結(jié)合率分別為23.2%，19.8%，28.1%；15.5%，25.8%，40.0%，統(tǒng)計學檢驗結(jié)果表明大蒜辣素大鼠與人血漿蛋白結(jié)合率有有顯著性差異(p＜0.05)。
　　3.大蒜辣素和蒜氨酸均不與直接與BHB作用，硫化氫可與BHB作用，結(jié)合常數(shù)在298和310 K時分別為Ksv：1.00×104L·mol-1，R=0.9969；Ksv=1.94×104L·mol-1

5、，R=0.9979，最大動態(tài)熒光猝滅速率常數(shù)Kq分別是1.00×1012(298 K)和1.94×1012L·(mol·s)-1(310K)；大蒜辣素、蒜氨酸及硫化氫均可與BSA和HSA相互作用。
　　4.大蒜辣素在大鼠四個腸段的表觀滲透系數(shù)Papp>1×10-6cm·s-1，不受藥物濃度的影響，各腸段的吸收速率常數(shù)Ka隨大蒜辣素濃度的增加而增加。
　　結(jié)論：
　　1.可直接從鮮蒜中提取分離得到較高濃度的大蒜辣素，后續(xù)

6、再采用分子蒸餾的方式進一步純化，相比于蒜氨酸蒜酶合成法，直接提取的方法可明顯提高大蒜辣素溶液的濃度,EP8.0中大蒜辣素含量測定方法可用于本實驗室測定。
　　2.大蒜辣素的人血漿蛋白結(jié)合率大于大鼠的血漿蛋白結(jié)合率，大蒜辣素屬于低度蛋白結(jié)合藥物，有明顯的種屬差異。
　　3.大蒜辣素及其前體物質(zhì)蒜氨酸不直接與血紅蛋白相互作用；大蒜辣素進入血液后部分進入紅細胞后轉(zhuǎn)化為硫化氫后與血紅蛋白相互作用，部分與血漿蛋白結(jié)合。
　　4.