HCBP6蛋白與HCVcore蛋白相互作用的研究.pdf

1、目的：
　　 在前期工作的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步應(yīng)用免疫共沉淀方法驗(yàn)證HCVcore蛋白與HCBP6蛋白之間的相互作用。并應(yīng)用激光共聚焦技術(shù)了解HCVcore蛋白與HCBP6蛋白的亞細(xì)胞定位。為進(jìn)一步明確HCBP6蛋白功能奠定基礎(chǔ)。方法：
　　 1、用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)HCBP6在7種癌細(xì)胞系的表達(dá)，選擇較高表達(dá)的細(xì)胞系用于隨后的蛋白之間相互作用的真核水平的研究。
　　 2、將真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-hcvco

2、re、pcDNA3.1/myc-his(-)-hcbp6、pcDNA3.1及pcDNA3.1/myc-his(-)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，應(yīng)用免疫共沉淀方法驗(yàn)證HCVcore蛋白與HCBP6蛋白之間的相互作用。
　　 3、構(gòu)建HCBP6的綠色熒光表達(dá)載體和HCVcore的紅色熒光表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，模擬該蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)，在激光共聚焦顯微鏡下觀察HCBP6及HCVcore蛋白的亞細(xì)胞定位。
　　 結(jié)果：

3、>　　 1、HCBP6在Capan2細(xì)胞中表達(dá)最高，依次為HepG2、Hela、Huh7、7721、7701與7402。
　　 2、pcDNA3.1-hcvcore及pcDNA3.1/myc-his(-)-hcbp6在HepG2細(xì)胞中單獨(dú)轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染都獲得成功。
　　 3、HCBP6的綠色熒光表達(dá)載體和HCVcore的紅色熒光表達(dá)載體在HepG2細(xì)胞中均得到表達(dá)。激光共聚焦顯微鏡觀察到HCBP6蛋白和HCVcore蛋白

4、均主要定位于細(xì)胞漿中。
　　 結(jié)論：
　　 1、HCVcore為丙型肝炎病毒核心蛋白，研究它與HCBP6之間的作用應(yīng)該選擇一種肝癌細(xì)胞系。HCBP6在HepG2細(xì)胞系中表達(dá)水平較高，又因?yàn)镠epG2是肝癌細(xì)胞系所以選擇HepG2為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞系。
　　 2、HCBP6蛋白和HCVcore蛋白之間確實(shí)存在相互作用。
　　 3、HCBP6蛋白和HCVcore蛋白在細(xì)胞內(nèi)均分布于細(xì)胞漿中，分布的部位相同，再次