CHD4蛋白與PTEN蛋白相互作用的鑒定.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩52頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:分別在細胞水平和體外檢測PTEN與Mi-2β/CHD4之間的相互作用,進一步明確其相互作用的結構域。
　　研究方法:本課題擬在已有工作的基礎上,利用GSTpull-down、免疫共沉淀等方法,檢測PTEN與Mi-2β/CHD4之間的相互作用,通過構建截短體,明確結合核心結構域。采用PCR方法擴增CHD4的染色質調節(jié)區(qū)(CHD4-C)、解螺旋酶模序(CHD4-H)及DNA結合區(qū)(CHD4-D)基因片段,將目的基因片段插入原核表

2、達載體pGEX-5T構建GST標簽的重組質粒,陽性克隆行DNA序列測定。IPTG誘導GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H原核表達,谷胱甘肽瓊脂糖珠純化融合蛋白,表達產物Westernblot進行鑒定。用純化后GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H融合蛋白與PTEN-HIS進行GSTpull-down檢測CHD4蛋白與PTEN蛋白在體外相互作用及作用結構域。將HA-PCMV、HA-CH

3、D4真核質粒轉染到293T細胞中,應用免疫共沉淀技術檢測CHD4蛋白與PTEN蛋白在細胞水平的相互作用。
　　結果:成功純化了較高純度的GST、GST-CHD4-C、GST-CHD4-D和GST-CHD4-H融合蛋白,并進行GSTpull-down結果表明CHD4蛋白與PTEN蛋白在體外相互作用且作用在CHD4染色質結合域端;免疫共沉淀技術檢測CHD4蛋白與PTEN蛋白在細胞水平存在相互作用,為進一步研究CHD4蛋白在染色質重塑中

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論