靶向NOTCH信號(hào)通路抑制急性白血病的分子機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文從以下幾方面進(jìn)行論述:
  第一部分:極光激酶B(Aurora Kinase B)抑制劑AZD1152誘導(dǎo)急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(T-ALL)凋亡的機(jī)制研究。
  目的:急性T淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL)是由于T細(xì)胞分化異常阻滯,發(fā)生惡變并在骨髓和周血中異常增殖而引發(fā)。白血病細(xì)胞可達(dá)到血細(xì)胞總量的80%,嚴(yán)重影響正常紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的分化和功能,還可能涉及到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移,死亡率很高而且容易復(fù)發(fā)。目前認(rèn)為N

2、OTCH1是T-ALL發(fā)生中的重要癌基因。針對(duì)NOTCH1信號(hào)通路的分子靶向治療受到越來(lái)越多的關(guān)注。但是,當(dāng)今靶向NOTCH1的藥物因其非專(zhuān)一性導(dǎo)致的毒副作用使得在臨床試驗(yàn)中都以失敗告終。我們考察已進(jìn)入臨床試驗(yàn)期抗腫瘤藥物AURKB抑制劑AZD1152能夠特異性殺傷T-ALL細(xì)胞并闡明其作用的分子藥理機(jī)制,以期為T(mén)-ALL的靶向治療提示新思路。
  方法:(1)CCK8法檢測(cè)AZD1152對(duì)不同T-ALL細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。(2)流

3、式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡及Western blot檢測(cè)相關(guān)蛋白的變化。(3)Western blot法檢測(cè)用藥處理后NOTCH1下游癌基因c-Myc的表達(dá)以及熒光定量PCR法檢測(cè)c-Myc下游靶基因的水平。(4)RNA干擾技術(shù)沉默AURKB后,考察功能缺失的影響。(5)Western blot法檢測(cè)AZD1152是否在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)節(jié)c-Myc。(6)Western blot法檢測(cè)AURKB是否能夠穩(wěn)定c-Myc。(7)蛋白質(zhì)免疫共沉

4、淀檢測(cè)AURKB是否能夠競(jìng)爭(zhēng)性地和GSK3β與c-Myc結(jié)合。
  結(jié)果:(1)AZD1152可以抑制T-ALL細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡。(2)抑制AURKB可以引起c-Myc的降解。(3)抑制 AURKB可以下調(diào)c-Myc的下游靶基因。(4)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)都證明AURK B能夠與c-Myc結(jié)合。(5)AURK B能夠顯著地穩(wěn)定c-Myc。(6)co-IP實(shí)驗(yàn)證明AURKB確實(shí)能夠阻斷GSK3β與c-Myc的結(jié)合引起的蛋白降解。

5、  結(jié)論:研究表明AURKB抑制劑AZD1152具有抗T-ALL的作用,體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)AURKB通過(guò)阻斷GSK3β與c-Myc結(jié)合,達(dá)到穩(wěn)定c-Myc蛋白的作用,抑制了AURKB的活性后,c-Myc能夠被降解。這項(xiàng)研究提示了AURKB抑制劑有可能成為治療T-ALL的藥物,為T(mén)-ALL患者帶來(lái)幫助。
  第二部分:天然小分子化合物NMHC通過(guò)激活NOTCH信號(hào)通路抑制急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞(AML)增殖的體內(nèi)外研究。
  目的:

6、急性髓性細(xì)胞白血?。ˋML)主要表現(xiàn)為骨髓中造血干細(xì)胞的惡性增殖,是一種較常見(jiàn)的血液惡性腫瘤疾病。近年來(lái),AML的治療雖有較大的進(jìn)展,但是大多數(shù)患者仍然死于耐藥,復(fù)發(fā)或并發(fā)癥。因此,臨床急需更有效的治療藥物。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),NOTCH信號(hào)通路在AML中發(fā)揮腫瘤抑制的作用。我們的前期實(shí)驗(yàn)表明NMHC能夠激活NOTCH而表現(xiàn)出顯著的抗AML作用,但是機(jī)制尚不明確。所以NMHC有可能為將來(lái)有效治療AML提供新的治療思路。
  方法:(1)表

7、達(dá)譜基因芯片分析NMHC處理的 AML細(xì)胞與對(duì)照組比基因的富集情況。(2)蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測(cè)NMHC處理AML細(xì)胞后NOTCH1的剪切情況。(3)計(jì)算機(jī)模擬技術(shù)(Molsoft ICM method)對(duì) NMHC的結(jié)構(gòu)與NOTCH1的所有結(jié)構(gòu)分別進(jìn)行模擬。(4)流式分析檢測(cè)抑制AML中的NOTCH信號(hào)通路后 NMHC誘導(dǎo) AML的細(xì)胞凋亡變化。(5)裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)藥物的體內(nèi)作用。
  結(jié)果:(1)NM

8、HC處理AML細(xì)胞后,NOTCH信號(hào)通路相關(guān)基因,AML相關(guān)基因,凋亡相關(guān)基因被富集;(2)NMHC處理促進(jìn)了NOTCH1跨膜受體的剪切;(3)NMHC能夠進(jìn)入NOTCH1的負(fù)調(diào)控區(qū)NRR的疏水口袋中,可能促使S2切割位點(diǎn)更易被切割,NOTCH1更易被激活。(4)NOTCH1被抑制后,NMHC誘導(dǎo)的AML細(xì)胞凋亡明顯減少。(5)NMHC明顯減弱AML異源移植小鼠的負(fù)荷。
  結(jié)論:體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究證明天然小分子化合物NMHC通過(guò)促進(jìn)

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