通過CD123分子靶向白血病干細胞治療急性髓性白血病的病毒-基因治療策略及研究.pdf

1、中山大學博士學位論文通過CD123分子靶向白血病干細胞治療急性髓性白血病的病毒基因治療策略及研究姓名：譚麗申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：黃文林20090526【l山人學博I：學位論文譚暇白血病的治療，不僅可以清除LSC而且還不會對造血于細胞(HematopoieticStemCell，HSC)造成損傷，是AML治療的有效方案。白血病的基因靶向治療是一種值得探索的方案。有效的基因治療依賴于外源基因高效、穩(wěn)定的表達，病毒載體介導的

2、基因轉移以其高轉染效率和良好的靶向性而成為基因治療中應用最廣泛的技術手段。基因治療涉及靶基因、靶基因載體和靶基因的表達調(diào)控。在本課題的研究中我tfJ汞]用CDl23分子作為靶，運用分子生物學的技術和手段對病毒載體進行修飾或加工使其能夠充分地靶向白血病母細胞群及白血病干細胞，以期達到治療白血病的目的。本研究分三部分：l、靶基因的選擇首先我們通過體外的細胞實驗確定了對細胞有明顯毒性作用的靶基因即長臂猿白血病病毒的融合基因包膜糖蛋白(Gibb

3、onApeleukemiavirus，GALV—FMG)，研究結果顯示GALV—FMG在AML細胞株HL60細胞中的表達可誘導細胞發(fā)牛融合，形成多核合胞體，融合指數(shù)在轉染后的96h達至1153257％，和空載體轉染組及空白組相比有顯著的差別(P005)。多核合胞體的形成可引起伴隨ATP消耗的線粒體失能，導致細胞發(fā)生壞死性死亡，PI染色發(fā)現(xiàn)死亡的多核合胞體在第5天達到總合胞體的約70％，而乳酸脫氫酶的活性在同樣的時間里也達到了約80％。說

4、明多核合胞體的不斷形成導致了細胞死亡的不斷發(fā)牛。我們通過AO／EB染色也發(fā)現(xiàn)GALVFMG轉染組的HL60細胞表現(xiàn)為大量的壞死。GALVFMG的表達引起細胞發(fā)生死亡的機制與HSP70的表達增加有關，我們的研究發(fā)現(xiàn)GALV—FMG的表達不僅可以誘導HSPT0的表達增高，而且還可以通過阻斷IrBa的降解來抑制NF出活性和核轉位，而NFk：B的抑制被發(fā)現(xiàn)又可以負調(diào)控HSP70的表達。因此GALVFMG可通過抑制NFrd3對HSP70的表達產(chǎn)生