哈爾滿的體內(nèi)外代謝與藥代動力學(xué)研究.pdf

1、目的:駱駝蓬總生物堿中的哈爾滿堿是治療阿爾茨海默癥(AD）的潛在藥物，因此在前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行哈爾滿生物堿在大鼠的體內(nèi)外代謝與藥代動力學(xué)研究。
　　方法:
　　1）采用差速離心法制備大鼠肝微粒體，并對所制備的大鼠肝微粒體進(jìn)行蛋白含量測定。
　　2）采用UPLC-ESI-MS/MS法同時測定9種探針代謝產(chǎn)物的濃度，對大鼠肝微粒體中9種細(xì)胞色素P450酶的活性進(jìn)行標(biāo)定，并對大鼠肝微粒體中9種細(xì)胞色素P450亞型酶的代謝動

2、力學(xué)進(jìn)行了研究。
　　3）采用UPLC-ESI-MS/MS法，對大鼠肝微粒體中Ⅱ相葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的活性進(jìn)行標(biāo)定。
　　4)采用超高效液相串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀，對哈爾滿生物堿在大鼠肝微粒體及肝S9中的Ⅰ、Ⅱ相代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定與研究。
　　5）采用超高效液相串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀，對哈爾滿生物堿在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定與研究。
　　6）采用UPLC-ESI-MS/MS法，對哈爾滿生物堿及其代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的藥代動力

3、學(xué)進(jìn)行研究。
　　結(jié)果:
　　1）采用差速離心法，經(jīng)過勻漿、兩次離心及洗滌，成功制備得到了大鼠肝微粒體。經(jīng)計算，所得的大鼠肝微粒體的得率為32mg microsome protein/g liver。
　　2）在優(yōu)化的色譜及質(zhì)譜條件下，對9種細(xì)胞色素P450酶催化產(chǎn)生的探針代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析與測定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明大鼠肝微粒體內(nèi)沒有CYP2A6亞型酶的活性。此外，在對大鼠肝微粒體中9種細(xì)胞色素P450亞型酶的代謝動力學(xué)的研

4、究中，采用GraphPad(Prism5)進(jìn)行數(shù)據(jù)擬合后，計算得到各亞型酶催化探針反應(yīng)的動力學(xué)參數(shù)Km和Vmax值及其酶促動力學(xué)曲線。根據(jù)Eadie-Hofstee作圖，可以得出，CYP3A4催化的睪酮羥基化符合希爾方程描述的動力學(xué)特征，而其他7種亞型酶催化的反應(yīng)均符合米氏方程所描述的典型的酶促反應(yīng)動力學(xué)特征。
　　3）在優(yōu)化的色譜及質(zhì)譜條件下，對大鼠肝微粒體內(nèi)Ⅱ相代謝酶UGT2B7催化產(chǎn)生的探針代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析與測定，結(jié)果表明

5、本實(shí)驗(yàn)室所制備的大鼠肝微粒體具有UGT2B7亞型酶的活性。
　　4）采用超高效液相串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀，對哈爾滿生物堿在大鼠肝微粒體及肝S9中的Ⅰ、Ⅱ相代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定與研究，研究結(jié)果顯示，一共鑒定了9個體外代謝產(chǎn)物，其中包括4個Ⅰ相代謝產(chǎn)物，5個Ⅱ相代謝產(chǎn)物（3個葡萄糖醛酸化物和2個硫酸化物）。
　　5)采用超高效液相串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀，對哈爾滿生物堿在大鼠體內(nèi)的Ⅰ、Ⅱ相代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定與研究，研究結(jié)果顯示，一共鑒定了20個

6、體內(nèi)代謝產(chǎn)物，其中尿液中11個代謝產(chǎn)物，糞便中16個代謝產(chǎn)物，膽汁中16個代謝產(chǎn)物以及血漿中10個代謝產(chǎn)物;此外，結(jié)果還顯示膽汁和糞便清除是主要的排泄途徑。
　　6）哈爾滿生物堿及其代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究結(jié)果表明，在靜脈(1.0mg/kg)和口服（30.0mg/kg）給予哈爾滿生物堿后，哈爾滿及其10個代謝產(chǎn)物同時被檢測。本研究中，通過半定量方法計算代謝產(chǎn)物的濃度，成功計算得到哈爾滿及其10個代謝產(chǎn)物的藥時曲線及藥代動