γ-分泌酶抑制劑對(duì)耐雷帕霉素人成骨肉瘤細(xì)胞增殖、侵襲及凋亡的影響.pdf

1、目的：通過研究γ-分泌酶抑制劑(DAPT)、雷帕霉素（RAPA）對(duì)骨肉瘤細(xì)胞株增殖、侵襲及凋亡的影響,初步研究DAPT對(duì)骨肉瘤細(xì)胞耐藥逆轉(zhuǎn)可能性，探討在骨肉瘤多藥耐藥機(jī)制中mTOR通路、Notch通路與相關(guān)影響因素的聯(lián)系。
　　方法：體外建立培養(yǎng)耐RAPA骨肉瘤MG-63細(xì)胞株；噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)耐RAPA骨肉瘤MG-63細(xì)胞株的耐藥指數(shù)，測(cè)定不同濃度的RAPA、DAPT對(duì)2種細(xì)胞株增殖影響;劃痕試驗(yàn)測(cè)定2種細(xì)胞株的遷移能

2、力；Transwell法檢測(cè)骨肉瘤MG-63細(xì)胞的侵襲能力，對(duì)比2種藥物干預(yù)下各細(xì)胞株侵襲過程中遷移率的差異；Annexin V-FITC/PI聯(lián)合流式細(xì)胞儀測(cè)定不同藥物對(duì)2種細(xì)胞株凋亡的影響;Western blot法檢測(cè)不同藥物作用下各細(xì)胞株中p53蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果顯示RAPA及DAPT均能抑制2種細(xì)胞株的增殖。Transwell結(jié)果表明2種細(xì)胞株在不同濃度藥物作用下遷移率出現(xiàn)明顯差異。流式檢測(cè)凋亡發(fā)現(xiàn)RAP

3、A、DAPT均能誘導(dǎo)2種細(xì)胞株細(xì)胞發(fā)生凋亡,骨肉瘤MG-63細(xì)胞早、晚期凋亡率均與藥物干預(yù)劑量呈正比,而實(shí)驗(yàn)組耐雷帕霉素MG-63細(xì)胞與空白對(duì)照組細(xì)胞比較，僅在高劑量藥物作用下,早、晚期凋亡率差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot檢測(cè)結(jié)果表明,在不同濃度RAPA、DAPT藥物作用下,2種細(xì)胞株中p53表達(dá)量存在差異，骨肉瘤MG-63細(xì)胞p53表達(dá)量呈藥物劑量依賴性,而耐雷帕霉素MG63細(xì)胞p53的表達(dá)量則未隨藥物濃度升高而明顯增加