TLR4通過(guò)PPARγ下調(diào)ABCG1表達(dá)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)炎癥反應(yīng)及脂質(zhì)沉積.pdf

1、背景與目的:
　　動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是慢性炎癥過(guò)程，由膽固醇及脂蛋白在血管壁的聚集而誘發(fā)。血液循環(huán)中多種細(xì)胞因子及血管壁多種細(xì)胞類型參與了AS的形成，包括內(nèi)皮細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell，SMC)。SMC在AS病變過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。SMC是血管壁上細(xì)胞外基質(zhì)的主要產(chǎn)生者，并根據(jù)致動(dòng)脈粥樣硬化的刺激改變其基質(zhì)蛋白的性質(zhì)。平滑肌細(xì)胞可向其他細(xì)胞功能轉(zhuǎn)

2、化，如巨噬細(xì)胞，SMC可表達(dá)多種脂質(zhì)攝取受體從而形成泡沫樣細(xì)胞。如內(nèi)皮細(xì)胞，SMC可表達(dá)多種粘附分子粘附并遷移進(jìn)入血管壁。
　　果蠅樣受體4(Toll like receptor4，TLR4)在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中起到重要作用，廣泛分布于巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。OxLDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)涉及許多機(jī)制，最近的研究發(fā)現(xiàn)TLR4高度表達(dá)于富含脂質(zhì)的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，而在TLR4基因缺陷的小鼠中動(dòng)脈粥樣硬化的病變明顯減

3、少。
　　過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ），其主要功能是細(xì)胞分化與脂質(zhì)代謝的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子，屬于核受體超家族成員。三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1(ABCG1)在膽固醇外流中發(fā)揮著重要作用，同時(shí)通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇平衡，ABCG1可能在抗凋亡和抗炎癥中發(fā)揮著重要作用。在巨噬細(xì)胞中PPARγ激動(dòng)劑可調(diào)節(jié)ABCG1的表達(dá)。
　　由此，我們推測(cè)TLR4在VSMCs炎癥反應(yīng)和脂質(zhì)沉積中發(fā)揮著重要作用，其中的分子機(jī)制可能是TLR4通過(guò)PPA

4、Rγ下調(diào)ABCG1的表達(dá)。
　　方法:
　　1.瓊脂糖凝膠電泳鑒定實(shí)驗(yàn)小鼠基因型;
　　2.組織貼塊法培養(yǎng)原代VSMCs;
　　3.免疫熒光染色鑒定原代VSMCs、觀察TLR4/PPARγ、TLR4/ABCG1共定位于細(xì)胞內(nèi);
　　4.real-time PCR檢測(cè)VSMCs內(nèi)TNF-α、IL-6、MCP-1、VCAM1mRNA表達(dá);
　　5.Western blot檢測(cè)VSMCs內(nèi)TLR4、PPAR

5、γ、ABCG1蛋白表達(dá)水平;
　　6.Bodipy染色檢測(cè)VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積，酶促比色的方法定量測(cè)定VSMCs內(nèi)總膽固醇含量;
　　7.羅格列酮激活WT-VSMCs內(nèi)PPARγ信號(hào)通路;
　　8.PPARγ-siRNA轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-VSMCs，使細(xì)胞內(nèi)PPARγ基因沉默。
　　結(jié)果:
　　1.鑒定了小鼠基因型，體外培養(yǎng)及鑒定了原代VSMCs;
　　2.免疫熒光染色鑒定TLR4/PPARγ、TLR4/AB

6、CG1共表達(dá)于WT-VSMCs中。
　　3.oxLDL刺激WT-VSMCs后，TLR4通路活化，TLR4表達(dá)增高，促進(jìn)了炎癥因子TNF-α、IL-6、MCP-1、VCAM1的分泌;TLR4基因敲除后上述炎癥因子分泌受抑制。
　　4.oxLDL刺激TLR4活化后，VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯增加;TLR4基因敲除后，VSMCs內(nèi)脂質(zhì)沉積減少。
　　5.TLR4激活后的PPARγ、ABCG1表達(dá)下調(diào)，TLR4基因敲除后PPAR